細(xì)胞凍存步驟：
1.預(yù)先配制凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清,，4℃冰箱保存預(yù)冷,； 2.用胰酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次,，用胰酶消化細(xì)胞（盡可能溫和）,； 3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,，將預(yù)冷的凍存液加入消化*的細(xì)胞中，用滴管輕輕吹打混勻,。 4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液,，密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。 5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的活力,，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過(guò)夜,，放入液氮罐）；或者可以在4℃,，2h,；然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h,；-80℃,，2h；放入液氮罐,。

解決方案：
1.凍存液：A:dmso 推薦 sigma （貨號(hào)D2650-100ml） B:胎牛血清根據(jù)自己習(xí)慣 1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高壓滅菌 2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存.. 3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比) 2.胰酶（hyclone 貨號(hào) sh30042.01） pbs （hyclone 貨號(hào)sh30256.01b）培養(yǎng)瓶,，離心管推薦coring 或者 falcon 槍頭推薦axygen （axygen槍頭已經(jīng)基本國(guó)產(chǎn)化） 3.凍存管推薦axygen的彩色凍存管，有各種顏色的蓋子,，方便分類,。且性價(jià)比較高。目前市場(chǎng)上nunc 和corning的一次性凍存管使用也很廣泛,，但如果量大不如axygen凍存管劃算?，F(xiàn)在還提供底部印有二維碼的方便識(shí)別的凍存管。 4.凍存盒：推薦使用biologix的紙質(zhì)凍存盒,，標(biāo)注清晰,，書寫后不容易掉色，且有各種顏色可選,。同時(shí)也有塑料凍存盒供使用,。質(zhì)量高，價(jià)格低,。 5.程序降溫盒：推薦 nalgene（貨號(hào) 5100-0001）,。使用zui廣，*的程序降溫盒,。 6.液氮罐：根據(jù)需求,，1000個(gè)樣本的儲(chǔ)存空間，推薦金鳳的yds-50b-125,，含6個(gè)6層25孔方提桶,，保護(hù)罩及一只真空安全帽，含不銹鋼盒,，zui多放900只樣本,。 7.另外還有冷凍記號(hào)筆,，不銹鋼凍存盒架，細(xì)胞濾網(wǎng),，凍存管支架等等,。

液氮罐使用注意事項(xiàng)：
1. 容器的使用維護(hù)：充液氮前要用少量的液氮預(yù)冷；補(bǔ)充液氮的時(shí)機(jī)是液氮剩余量為總?cè)萘康?/3為宜,；嚴(yán)禁在容器蓋上放置物體和密封瓶口,；嚴(yán)防敲擊碰撞。 2. 不能用其他塞子代替罐蓋,，更不能密封塞子,，以免液氮蒸發(fā)，壓力增高,，損傷容器,；檢查容器液面高度時(shí)，應(yīng)用塑料小棒或?qū)嵭男∧景舨迦氲撞?，過(guò)5-10s后取出,，結(jié)霜的長(zhǎng)度即為液面高度。

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