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原代細(xì)胞復(fù)蘇的基本操作方法及其常用耗材介紹
閱讀：2589發(fā)布時間：2015-5-25
一,、實驗準(zhǔn)備
（1）儀器：凈化工作臺,、離心機、恒溫水浴箱,、倒置相差顯微鏡,、培養(yǎng)箱、液氮冰箱
（2）玻璃器皿：吸管（彎頭,、直頭）,、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶（250ml,、100ml）,、廢液缸
（3）塑料器皿：吸頭、槍頭,、膠塞,、移液管（10ml）、15ml離心管,、凍存管（1～2ml）
（4）其他物品：微量加樣槍,、紅血球計數(shù)板、記號筆,、醫(yī)用橡皮膏,、移液槍
（5）試劑：PBS,、小牛血清、培養(yǎng)液,、雙抗（青霉素,、鏈霉素）、胰蛋白酶（0.08%）
二,、操作步驟
（1）從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化,。
（2）從37℃水浴中取出凍存管,，75％酒精消毒后，打開蓋子,，用吸管吸出細(xì)胞懸液,，加到離心管中。PriCells 推薦 接種培養(yǎng)瓶,， 37 ℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng) ,。
（3）離心，1000rpm,，5min,。PriCells推薦不離心 。
（4）棄去上清液,，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度,，接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。PriCells 推薦 小牛血清 濃度依據(jù)原代細(xì)胞種類 ,。
（5）次日更換一次1／2培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),。
三,、注意事項
（1）將凍存管從液氮容器中取出時，要做好防護工作,，以免凍傷,。
（2）取出凍存管后立即放入水浴中，使其盡快融化（在1－2分鐘內(nèi)）,。
（3）復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液,。
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