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Cygnus Vero細(xì)胞HCP ELISA檢測試劑盒的檢測原理
閱讀：1280發(fā)布時間：2023-2-1
CygnusVeroCellHCPELISAKitVero細(xì)胞HCP試劑盒檢測原理：
VeroCell檢測是一個雙位點酶聯(lián)免疫檢測,。樣本中包含的VeroCellHCPs蛋白與標(biāo)記有抗-VeroCell抗體的辣根過氧化物酶同時反應(yīng),，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-VeroCell蛋白抗體的微量滴定板中進行。免疫反構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體,。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物,。添加TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測定水解物濃度,，水解物濃度與VeroCellHCPs蛋白濃度成比例,。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計算出VeroCellHCPs蛋白含量,。
檢測過程：
取出所有試劑平衡到室溫→分別移取50µl標(biāo)準(zhǔn)液,，對照物和樣品至待測孔→移取100µlanti-VeroCell:HRP（#F501）至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育2小時,，180rpm→清空小孔,，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µlTMB作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘,，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液（#F006）→分光光度計450/650nm讀數(shù)
結(jié)果分析：
標(biāo)準(zhǔn)液（0,2,8,25,75,200ng/mL）可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,，標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度,。根據(jù)測定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計算機選配曲線,，例如點到點,，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線,。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值,，這樣會出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖,，Y軸標(biāo)注吸光值,，X軸標(biāo)注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度,。（操作時每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要滴定到兩個小孔中,，以便計算平均分光光度值，樣品也需計算平均吸光值）,。
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