實(shí)驗(yàn)室雖然有程序降溫凍存盒,，但怎么使用一直都搞不明白，我覺得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時(shí)間(細(xì)胞剛開始還沒凍的時(shí)候就是室溫),，然后把細(xì)胞放進(jìn)去,，再一起移到-80度，這樣才能實(shí)現(xiàn)程序降溫呢?時(shí)間使用長了,，感覺里面的液體是不是異丙醇啊,，使用時(shí)間長了會(huì)不會(huì)揮發(fā)或變質(zhì)什么的，要不要添加或維護(hù)一下呢,，還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分,，要補(bǔ)充嗎?

經(jīng)驗(yàn)1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于最底線,。

凍存盒肯定是先放在室溫,，然后放進(jìn)去細(xì)胞，置于-80,，利用異丙醇實(shí)現(xiàn)梯度降溫啊,。)

根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過一段時(shí)間后是要更換的,，但是我一直沒換過,，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。

經(jīng)驗(yàn)2：我們實(shí)驗(yàn)室凍存盒平時(shí)放4度,，需要凍細(xì)胞時(shí)直接拿出來用就可以了,。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會(huì)影響復(fù)蘇成活率的,。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便,，效果也不錯(cuò)的,。

經(jīng)驗(yàn)3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線,，否則不能起到很好的程序性降溫作用,，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱,，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,，效果很不錯(cuò)。異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w,。注意了有可燃性!急性毒性：口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤,。刺激數(shù)據(jù)：眼睛-兔子100毫克/!請(qǐng)注意清理!

經(jīng)驗(yàn)4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因?yàn)樘荻冉禍氐钠鹗键c(diǎn)是室溫20°左右,，所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時(shí)間待其恢復(fù)到室溫再使用,。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達(dá)到刻度線,，否則降溫效果會(huì)受到影響,。

經(jīng)驗(yàn)5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml,，低于刻度了要加上,，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對(duì)環(huán)境有害,，我們可以多用幾次,，只是少了的時(shí)候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對(duì)細(xì)胞有毒性,，尤其是室溫的時(shí)候,，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,，還放回4°,，等到出細(xì)胞間的時(shí)候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮,。

程序降溫盒這個(gè)梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率,，由于程序降溫盒內(nèi)存在*濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇

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