 | 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
15021010459
在線溝通：
顏先生 （經(jīng)理）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機(jī)：
- 15021010459
- 傳真：
- 023-63419626
- 聯(lián)系我時,，
- 告知來自化工儀器網(wǎng)
- 個性化：
- www.hystemcell.cn
- 商鋪網(wǎng)址：
- http://sorrent.com.cn/st275923/
- 公司網(wǎng)站：
- https://www.ys-bio.cn/
細(xì)胞培養(yǎng)中檢測支原體的常用方法
閱讀：2380發(fā)布時間：2021-4-6
支原體是1898年Nocard等發(fā)現(xiàn)的一種類似細(xì)菌但不具有細(xì)胞壁的原核微生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長繁殖,，直徑50-300nm,，能通過細(xì)菌濾器。支原體在過去曾稱之為類胸膜肺炎微生物（pleuropneumonia-like organism,，PPLO）,，1967年正式命名為支原體。
支原體（mycoplasma）：又稱霉形體,，為目前發(fā)現(xiàn)的原核生物,，基因數(shù)量為480。支原體細(xì)胞中可見的細(xì)胞器是核糖體（支原體是原核細(xì)胞,，原核細(xì)胞的細(xì)胞器只有核糖體）,。支原體結(jié)構(gòu)也比較簡單，多數(shù)呈球形,，沒有細(xì)胞壁,，只有三層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞膜，故具有較大的可變性,。
支原體這種微小的微生物,，是細(xì)胞培養(yǎng)中令人頭疼的大問題。支原體污染可能來自培養(yǎng)基,、血清或?qū)嶒灢僮髡?，會影響?xì)胞生長率、細(xì)胞形態(tài),、基因表達(dá),、細(xì)胞代謝和細(xì)胞活力。支原體感染不易察覺,，因此對培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測就非常重要,。
污染實驗室培養(yǎng)細(xì)胞的支原體主要有八種，但還沒有哪種檢測方法能夠單槍匹馬把這八種支原體都檢測出來,。支原體非常頑強(qiáng),，通常用于細(xì)胞培養(yǎng)的絕大多數(shù)抗生素都對其無效。例如青霉素主要作用于細(xì)菌細(xì)胞壁,，但支原體沒有細(xì)胞壁因此就不受影響,。無懈可擊的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)始終是預(yù)防支原體感染的方式，另外及時找出受到支原體感染的培養(yǎng)物也很重要,，這樣才能在感染擴(kuò)散前快速采取有效措施,。下面就為大家介紹幾種在培養(yǎng)細(xì)胞中檢測支原體的方法,。
分離培養(yǎng)法
分離培養(yǎng)法是支原體檢測的金標(biāo)方法，其檢測度高,。這種方法是從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣,，并接種到支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體,，它們就會在這種瓊脂平板上*生長,，形成明顯可見的特征性菌落。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果,，因此被譽(yù)為支原體檢測金標(biāo)準(zhǔn),。不過分離培養(yǎng)法也存在兩個弊端，一是檢測時間太長,，支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間,。二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類,，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候,，例如支原體M. hyorhinis。
DNA檢測法
DNA檢測需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng),，因此一般需要幾天時間,。DNA檢測所用的指示細(xì)胞通常是細(xì)胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細(xì)胞，如果原樣本中含有支原體,，那么當(dāng)細(xì)胞DNA被熒光染料（如Hoechst染料）染色時,，就可以在指示細(xì)胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒。分離培養(yǎng)法用來檢測支原體M. hyorhinis菌株并不可靠,，而DNA法可以準(zhǔn)確的將其檢測出來,。
PCR法
PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株，PCR法檢測支原體只需幾個小時,，是但也是的支原體檢測方法,。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本，其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因,。在凝膠電泳過程中,，支原體DNA會顯示為特異性條帶，以此指示支原體的存在,。PCR法可以檢測大多數(shù)支原體,，但謹(jǐn)慎起見同時使用另一種檢測方法來進(jìn)行驗證。
酶學(xué)檢測和ELISA
此外,，也還存在一些其他支原體檢測方法,。例如酶學(xué)檢測是將可疑樣本添加到特定底物中，在這一體系內(nèi)支原體的酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP,，隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在,。ELISA也能用于支原體檢測,，以ELISA法為基礎(chǔ)的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標(biāo)記探針或抗體，來檢測培養(yǎng)物中是否含有支原體,。
定期檢測法
支原體感染會使培養(yǎng)細(xì)胞慢慢枯萎,，因此對培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應(yīng)該進(jìn)行一次支原體檢測,。將定期支原體檢測常規(guī)化堅持下去,，是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室應(yīng)對支原體感染的關(guān)鍵。
以上信息由企業(yè)自行提供,，信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),，化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任,。 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量,。