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PeproTech細胞因子常見問題解答
閱讀：1897發(fā)布時間：2020-12-25
PeproTech研制出的無動物成分的重組蛋白(animal-free recombinant proteins),，是利用專有的無動物成分生產(chǎn)設施,，在嚴格的無動物成分條件下生產(chǎn)出來，因此痕量的動物源性污染引發(fā)潛在問題的可能性被降至低,，從而*達到臨床前研究和細胞治療用標準,。PeproTech研發(fā)無動物成分的培養(yǎng)基添加物試劑盒(animal-free Media Supplement Kits)。這些試劑盒經(jīng)改良設計,，其中的無血清組分對多種哺乳動物細胞的生長有更好的維持能力,。
優(yōu)質的RUO細胞因子
全長和*生物活性的RUO細胞因子是由我們經(jīng)驗豐富的蛋白質科學家內(nèi)部開發(fā)的。該過程從我們的分子生物學實驗室開始,，進行基因設計和表達,，然后到細胞銀行，進行發(fā)酵/細胞培養(yǎng),，純化,，終進行QC測試。
大腸桿菌（E.coli）表達蛋白：
PeproTech擁有超過15,000平方英尺的發(fā)酵,，蛋白質加工和凈化設備,，能夠滿足客戶的需求。
細胞培養(yǎng)表達蛋白：
PeproTech擁有*的細胞培養(yǎng)和蛋白質純化設備,，能夠提供糖基化的*生物活性蛋白,。
常見問題 - RUO細胞因子
每個產(chǎn)品的相關信息均在該產(chǎn)品隨附的CoA(說明書)中，請仔細閱讀這些信息,，以獲知溶解和存儲的方法,。
1. 你們的蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何,？
除非在產(chǎn)品說明書中特別注明，我們的所有產(chǎn)品均為凍干粉,，在室溫條件下非常穩(wěn)定,。盡管如此，我們還是建議您將凍干產(chǎn)品保存在-20oC至-80oC,。對于大多數(shù)產(chǎn)品,，重懸后在4oC僅能短期保存。如想長期保存,，請用含載體蛋白(如0.1% BSA)的溶液稀釋已重懸的蛋白,，然后分裝、凍存于-20oC至-80oC,。分裝濃度要求不低于1 µg/ml,，每管體積要求不小于10µl。務必注意,，請避免反復凍融,，因每次凍融均可能引起蛋白的部分變性。因此,，我們建議分裝的蛋白溶液凍融不要超過1次,。
2. PeproTech重組蛋白的內(nèi)毒素水平如何？
PeproTech大部分無動物成分級別蛋白的內(nèi)毒素水平均保證低于0.01 ng/µg蛋白,，即0.1 EU/µg蛋白,。對于大多數(shù)非無動物成分級別的蛋白，內(nèi)毒素水平保證低于0.1 ng/µg蛋白,，即1 EU/µg,。其實，許多蛋白的實際內(nèi)毒素含量均低于上面標稱的內(nèi)毒素水平,，具體信息請與我們的質量保證(QA)部門聯(lián)系,。
3. 為什么我在管中看不到蛋白團塊？
與市場上的許多蛋白產(chǎn)品不同,，PeproTech的產(chǎn)品中不含任何載體蛋白和其它添加物 (如BSA, HSA和蔗糖等),，并且常在含鹽量的溶液中凍干，結果是微量的蛋白在凍干過程中會沉積在管壁上,，形成蛋白薄膜,，有時肉眼觀察不到。我們建議,，在打開管蓋前用小離心機快速離心20-30秒,，使附著在管蓋或管壁上的蛋白團塊聚集于管底。盡管可能看不到蛋白團塊,，但我們的質控程序保證每管中的蛋白含量準確無誤,。
4. 哪些細胞因子有種屬交叉活性,？
除少數(shù)例外，大多數(shù)人細胞因子對小鼠細胞均有活性,，很多小鼠細胞因子也可作用于人,，但反應的特異性可能低于對應的人細胞因子。IL-7等為數(shù)不多的人細胞因子作用于小鼠細胞時,，甚至比對應的小鼠細胞因子活性還強,。干擾素，GM-CSF, IL-3和IL-4等細胞因子的種屬特異性很強,，與其它種屬細胞的交叉反應活性非常弱。相反,，成纖維細胞生長因子(FGF)和神經(jīng)營養(yǎng)素(neurotrophins)等高度保守,，在不同動物種屬細胞上均呈現(xiàn)良好的生物學活性。
5. ED50和units/mg均用來表示比活性(specific activity),，兩者之間有什么關聯(lián),？
ED50的定義是可誘導50%大反應的細胞因子濃度，而比活性(specific activity)是單位重量蛋白樣品中所含的活性單位,。比活性單位(Specific Activity Units)只能用于表示蛋白的效能,，且僅適用于劑量反應曲線為S形的蛋白。
6. 比活性單位(specific activity units)和活性的單位(International Units)之間有什么關聯(lián),？比活性單位和單位(IU)之間沒有直接的關聯(lián),，不能相互換算。
單位(IU)是與標準品的活性單位(即IU/ng)比對后得出的活性數(shù)值,，后者是在世界衛(wèi)生組織(WHO)領導的合作研究中確定的,。WHO標準品由英國國家生物制品檢定所(NIBSC)制備和提供。
簡單地與標準品比對而得出的蛋白活性單位(IU)常會出現(xiàn)偏差,，原因是每個蛋白廠家所用的活性檢測方法很難一致,，從而導致與標準品比對后得到的單位(IU)值相互間不具可比性。想要實現(xiàn)真正的可比性,，必須建立標準的活性檢測方法,，以保證所得出的蛋白活性單位(IU)值僅與蛋白的質量有關，而與蛋白的來源無關,。
7. PeproTech是怎樣得到蛋白活性的單位(IU)值的,？
在可能的情況下，PeproTech通過將自己的產(chǎn)品與對應的WHO標準品在自已的生物活性測試中進行多次平行比對來得出單位(IU)值,。多次對比可保證我們能夠排除因測試本身的不穩(wěn)定性(如產(chǎn)品批次,，使用方法和測試方案等的變異性)而導致的異常值的出現(xiàn)。經(jīng)多次比對得出的結果可對我們產(chǎn)品的單位(IU)值進行可靠的定量,。
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