　　伴隨著科技進步持續(xù)的發(fā)展趨勢,，醫(yī)學(xué)技術(shù)也在持續(xù)提高,。前兩年冷凍人的惡性事件讓眼前一亮，原先不僅是食材能夠冷藏儲存,，就連身體也可以冷藏儲存,。假如要想做到那樣的目地，那麼就需要體細胞冷凍液,，這類東西如何配備呢?下邊就來實際的了解一下,，細胞凍存液的秘方是啥？

　　細胞凍存液的配方是什么,？

　　(一)細胞凍存

　　1. 配置含10%DMSO或凡士林,、10～20%小牛血清的凍存細胞培養(yǎng)液;

　　2. 取對數(shù)成長期的體細胞，除去舊細胞培養(yǎng)液,，用PBS清理,。

　　3. 除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長發(fā)育的體細胞消化吸收出來;

　　4. 抽濾1000rpm,，5min;

　　5. 除去蛋白酶,，添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱,，記數(shù),，調(diào)整凍存液中體細胞的后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;

　　6. 將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5 ml;

　　7. 在凍存管上標出體細胞的名字,，凍存時間及作業(yè)者;

　　8. 凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時,，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時,，則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h,，隨后放進-70℃電冰箱中留宿,，取下凍存管，移進液氮容器內(nèi),。

　　(二) 細胞復(fù)蘇

　　1. 從液氮容器中取下凍存管,，立即滲入37℃溫開水中，并時常搖晃令其盡早溶化,。

　　2. 從37℃水浴中取下凍存管,，開啟外蓋，用塑料吸管吸出來體細胞懸液,，加到離心管并滴加10倍以上細胞培養(yǎng)液,，攪拌;

　　3. 抽濾， 1000rpm,，5min;

　　4. 棄去上清液,，添加含10%小牛血清細胞培養(yǎng)液重懸體細胞，記數(shù),，調(diào)節(jié)體細胞相對密度,，打疫苗塑造瓶，37℃恒溫箱靜放塑造;

　　5. 隔日拆換一次細胞培養(yǎng)液,，再次塑造,。

　　常見問題

　　1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細胞之前的塑造體細胞都能夠用以凍存，但zui好是為多數(shù)成長期體細胞,。在凍存前一天*是換一次細胞培養(yǎng)液;

　　2.將凍存管放進液氮容器或從這當中取下時,，要搞好安全防護工作中，以防凍傷;

　　3.凍存和再生zui好用新配置的細胞培養(yǎng)液,。

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