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SFM無血清培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)
閱讀:1205發(fā)布時(shí)間:2020-5-21
SFM無血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,,與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比,,既能滿足細(xì)胞在體外長時(shí)間培養(yǎng)的要求,又能避免動(dòng)物血清所帶來的不利因素,。SFM無血清培養(yǎng)基被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物細(xì)胞以制備單克隆抗體,,病毒抗原和重組蛋白等。
大多數(shù)的無血清培養(yǎng)基含有向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素,,以及一些蛋白質(zhì)和清蛋白,,纖維蛋白,胎球蛋白等,,這些蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同的功能,,如提供細(xì)胞貼壁所需的基質(zhì),抗生物反應(yīng)器剪切力,,作為脂質(zhì)和其他生長分化因子的載體等,。
那么接下來就讓我們?cè)賮砹私庖幌耂FM無血清培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)有哪些吧。
建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物,,直到每一次細(xì)胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基,。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進(jìn)行幾次傳代,。
在適應(yīng)過程中,,不要讓細(xì)胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性,。需要注意,,與有血清培養(yǎng)基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì),,因而更易于受外界因素的影響,。
細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)替代血清:許多細(xì)胞利用連續(xù)適應(yīng)方法能很好的適應(yīng),用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1(v∶v)的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式,,連續(xù)幾代減少當(dāng)前培養(yǎng)基的量:1∶2,1∶4,,1∶16和100%替代培養(yǎng)基,。每次適應(yīng)改變血清比例時(shí),傳代細(xì)胞2到3次,。
培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清,。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清,生長的延遲可能會(huì)發(fā)生,,4允許進(jìn)行2到3次的傳代,,使生長率恢復(fù)到以前的水平,。
特別需要強(qiáng)調(diào)的是:配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水,如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水,。因?yàn)闊o血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素,、保護(hù)細(xì)胞的大分子,既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微,,也可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生致死性損害,。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵因素之一。
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