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內(nèi)皮細胞3D培養(yǎng)模型的優(yōu)化探索
閱讀：1822發(fā)布時間：2019-12-18
----Lifeline授權(quán)代理新品熱銷系列內(nèi)皮細胞
內(nèi)皮細胞和細胞外基質(zhì)（ECM）
內(nèi)皮細胞排列在循環(huán)系統(tǒng)的血管中,，為血管的穩(wěn)定,，傷口修復(fù)和炎癥反應(yīng)提供重要支持,。ECM是人體所有組織的關(guān)鍵部分,，可提供結(jié)構(gòu)支持并介導(dǎo)細胞粘附和細胞間相互作用。內(nèi)皮細胞層下面是基底膜,，基底膜是將內(nèi)皮細胞錨定在下面的組織結(jié)構(gòu)上的ECM薄片,。內(nèi)皮細胞與基底膜和周圍ECM的相互作用驅(qū)動組織穩(wěn)態(tài)，并有助于內(nèi)皮的整體功能,，支持內(nèi)皮屏障功能并調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞的增殖和存活,。
Lifeline®HUVEC在水凝膠生物工程中的應(yīng)用
在培養(yǎng)中研究細胞行為一直是一個挑戰(zhàn)。當(dāng)細胞從組織的3D環(huán)境中移除時,，它們將失去與ECM和基底膜的接觸,；這會改變細胞的行為，而不反映出同一細胞在組織中的行為,。因此,，研究人員長期以來一直擔(dān)心在塑料培養(yǎng)皿上研究細胞不是復(fù)制體內(nèi)環(huán)境的*方法。因此,，長期以來,，人們一直非常關(guān)注優(yōu)化3D培養(yǎng)系統(tǒng)以更緊密地模擬細胞在體內(nèi)可能經(jīng)歷的過程。
Su和他的同事在今年的一項研究中著手開發(fā)一種更好的3D培養(yǎng)基質(zhì),，用于體外模擬基底膜,，尤其是用于研究內(nèi)皮細胞。他們使用PEGX方法（聚乙二醇[PEG]交聯(lián)）制成水凝膠基質(zhì),，并與兩種肽結(jié)合：YIGSR（源自層粘連蛋白,，一種基底膜蛋白）和QK（一種血管內(nèi)皮生長因子[VEGF]模擬物） 。他們假設(shè)將這兩種生物活性肽添加到水凝膠中將支持內(nèi)皮細胞的附著和信號傳導(dǎo),。
作者首先使用條件永生化的腎小球內(nèi)皮細胞（GEnCs）確定了YIGSR和QK肽的*濃度,，該細胞在含有100 mM QK和12 mM YIGSR的水凝膠上形成了大數(shù)量的繩狀結(jié)構(gòu),。水凝膠中游離胺含量的定量以及流變學(xué)表征（材料在力作用下如何變形的表征）證明水凝膠的交聯(lián)和生物活性肽的綴合是成功的。另外,，掃描電鏡結(jié)果表明,，在不同的水凝膠上幾乎沒有結(jié)構(gòu)變化。
隨后,，作者測試了水凝膠中QK肽的生物活性,。他們在QK水凝膠上培養(yǎng)了Lifeline®人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）,，并測量了VEGF受體VEGFR2的磷酸化,，該蛋白在QK結(jié)合后會增加。如預(yù)期的那樣,，作者觀察到在QK水凝膠上生長的HUVEC和GEnC中VEGFR2磷酸化增加,。
進一步的分析表明，在QK水凝膠上生長的HUVEC形成了索狀結(jié)構(gòu),，并隨著時間的流逝而得以維持,。這與在基質(zhì)膠（一種常用的3D培養(yǎng)基質(zhì)）上進行培養(yǎng)形成對比，在基質(zhì)膠上形成了這些索狀結(jié)構(gòu),，但終卻退了下來,。作者還發(fā)現(xiàn)，在QK / YIGSR水凝膠上培養(yǎng)5天后,，參與細胞-細胞相互作用,，細胞表面受體信號傳導(dǎo)和內(nèi)皮細胞功能的多個基因的基因表達上調(diào)。與HUVEC的行為相反,，GEnC在QK,，YIGSR和QK / YIGSR水凝膠上形成了較不牢固的簾線狀結(jié)構(gòu)，此外,，GEnC基因表達的大增加發(fā)生在基質(zhì)膠上,，而不是在研究的水凝膠上。
這項研究的結(jié)果表明使用PEGX方法開發(fā)并與生物活性肽綴合的水凝膠是c,，盡管不同細胞類型對水凝膠上生長的反應(yīng)可能不同,。
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