　　方法：動物經(jīng)頸動脈放血后，在無菌操作下迅速取出胸腹主動脈段,，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次,，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管,，刮除內(nèi)膜即內(nèi)皮細(xì)胞迅速撕下中膜內(nèi),、中層，切成約1mm寬的小條,，浸泡在含血清的Hank's液中,，并將撕下小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37℃恒溫箱,，2h左右,，取出培養(yǎng)瓶加入20% 胎牛血清的培養(yǎng)液,，再放回培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)4天。4天后可見細(xì)胞從組織中遷移游出,。

　　不同動物血管結(jié)構(gòu)有差異,，豬和猴較易操作，但小動物如兔,、鼠因其血管小,，血管壁薄等特點，使之難以分離,。另外組織塊太薄,，不易粘附培養(yǎng)基，也使細(xì)胞較難生長,。為了保證培養(yǎng)的成功,，應(yīng)注意：

　　①種植組織塊的數(shù)目,，如75cm2的長頸瓶組織塊不得少于30;

　?、诟鶕?jù)培養(yǎng)細(xì)胞的種屬加入適量的不同血清，一般可加入牛血清,，若小牛血清增殖效果差,，應(yīng)加胎牛血清(FBS)，通常濃度為10%～20%;

　?、叟囵B(yǎng)基的選擇：常用的有DMEM,，M199培養(yǎng)基。培養(yǎng)兔的平滑肌細(xì)胞用DMEM效果較好,。

　　2,、酶解離法

　　沿動脈縱軸切開后，刮除內(nèi)皮細(xì)胞撕下中膜的內(nèi)2/3,，注意不要混入內(nèi)皮細(xì)胞，將組織塊切成1-2mm2,，放入加有3mg/ml膠原酶的無血清M199培養(yǎng)基中,，37℃，0.5～1.5h,。離心去上清,，重復(fù)上述消化步驟，然后再離心(9000r,4min),，收集細(xì)胞,，在5%～10%同種血清或HyClone胎牛血清的M199培養(yǎng)基中調(diào)整細(xì)胞數(shù)，然后轉(zhuǎn)入30～90mm培養(yǎng)皿中培養(yǎng),，對于兔子應(yīng)加入高濃度的谷氨酰胺(0.2g/L)較佳,。不同研究者在培養(yǎng)基,、酶濃度以及消化時間等的選擇都有很大的差異。

　　綜上所述,，貼塊法具有獲得平滑肌細(xì)胞純度高,，量多，操作簡便的優(yōu)點,。但用貼塊法易使平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)肌絲喪失,，亞細(xì)胞器增加。相反,，酶解離法,，由于酶的作用使細(xì)胞間失去連接，細(xì)胞內(nèi)肌絲含量豐富,，保持收縮型狀態(tài),。培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞常取材于兔、豬,、鼠,、猴的胸腹主動脈段。由于貼塊法和解離法處理方式不同,，在細(xì)胞培養(yǎng)的zui初階段細(xì)胞形態(tài)和性質(zhì)存在差異。隨著培養(yǎng)時間的延長,，培養(yǎng)環(huán)境趨于一致,，細(xì)胞特性上也趨于近似。

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