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細胞凍存操作步驟
閱讀：3035發(fā)布時間：2019-3-4
操作步驟
（一）細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；
2. 取對數(shù)生長期的細胞,，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。
3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來,；
4. 離心1000rpm,，5min；
5. 去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù),，調節(jié)凍存液中細胞的終密度為5×106/ml～1×107/ml,；
6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml,；
7. 在凍存管上標明細胞的名稱,，凍存時間及操作者；
8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min,；當溫度達-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時,，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內。
（二） 細胞復蘇
1. 從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃溫水中,，并不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管,，打開蓋子,，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,，混勻；
3. 離心,， 1000rpm,，5min；
4. 棄去上清液,，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞,，計數(shù)，調整細胞密度,，接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；
5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng),。
重慶市華雅干細胞技術有限公司主營產(chǎn)品：Lonza支原體檢測試劑盒,Stemcell胚胎干細胞培養(yǎng)基,StemRD生長分化因子
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