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StemRD生長分化因子樣本處理及要求

閱讀:1610發(fā)布時間:2018-8-13

StemRD生長分化因子是一種共價結(jié)合膽固醇的分泌性蛋白,,在動物發(fā)育中起重要作用,。果蠅的該基因突變導致幼蟲體表出現(xiàn)許多刺突,形似刺猬,,故名Hedgehog,。脊椎動物中至少有3個基因編碼Hedgehog蛋白,即:Shh(Sonic hedgehog),、Ihh(Indian hedgehog)和Dhh(desert hedgehog),。Hedgehog(Hh)信號通路調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育和成體許多組織器官干細胞的自我更新與增殖。然而,,那些在正常發(fā)育過程中受到Hh信號通路調(diào)節(jié)的組織器官
StemRD生長分化因子樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心,。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。
5. 組織標本:切割標本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

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