在生物醫(yī)學(xué)研究中,，液相蛋白定量檢測(cè)是不·可或·缺的環(huán)節(jié)。然而,，傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)大多只能針對(duì)單一指標(biāo)進(jìn)行分析,，若需同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo),，則需大量樣本分批檢測(cè)，操作繁瑣且各指標(biāo)間差異較大,。對(duì)于樣本量較少或需對(duì)比各指標(biāo)的研究者而言,，傳統(tǒng)技術(shù)難以滿足需求。例如,，在細(xì)胞培養(yǎng)上清或血清中,，細(xì)胞因子含量較低，常低于常規(guī)檢測(cè)方法的下限,，使用Western Blot等常規(guī)蛋白檢測(cè)方法難以奏效,。為此，BD-Pharmingen公司開發(fā)了一種基于流式細(xì)胞儀的液相蛋白定量技術(shù)——CBA（Cytometric Bead Array,，細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)）,，為這一難題提供了有效解決方案。
CBA技術(shù)原理CBA是一種基于流式細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測(cè)方法,，可同時(shí)對(duì)單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),。BD公司借助流式細(xì)胞儀對(duì)熒光信號(hào)具有級(jí)數(shù)放大的特性，將待測(cè)的可溶性因子附著于近似細(xì)胞直徑的微粒上,，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中多種可溶性因子的檢測(cè),。其基本原理與ELISA相似，通過微小,、分散的顆粒捕獲液體待測(cè)物,，并利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)類似“三明治"結(jié)構(gòu)的顆?！郎y(cè)物復(fù)合體所散發(fā)的熒光,，進(jìn)而測(cè)定待測(cè)物的數(shù)量。
在CBA檢測(cè)過程中,，每個(gè)微球大小一致,，帶有特定熒光強(qiáng)度，并包被有特異性捕獲抗體,，為待測(cè)物提供類似ELISA孔板的捕獲表面,。當(dāng)微球與待測(cè)樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體與樣品中的相應(yīng)抗原或蛋白結(jié)合,，隨后加入熒光標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，形成“三明治"夾心復(fù)合物。通過流式細(xì)胞儀,，CBA可對(duì)特異性目的蛋白進(jìn)行檢測(cè),。每種微球攜帶不同強(qiáng)度的紅色熒光，通過流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè)微球熒光強(qiáng)度差異實(shí)現(xiàn)目的蛋白的定性,；檢測(cè)抗體帶有PE熒光素標(biāo)記,，在FL2通道檢測(cè),，通過檢測(cè)抗體的PE熒光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)目的蛋白的定量。
CBA技術(shù)特點(diǎn)CBA融合了ELISA和細(xì)胞流式技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),，是一種先進(jìn)的液相蛋白檢測(cè)技術(shù),。與ELISA相比，CBA的捕獲微球呈懸浮態(tài),，能更高效地捕獲被分析物,；同時(shí)，它還具備流式細(xì)胞儀寬范圍熒光檢測(cè)的特點(diǎn),，對(duì)樣本需求量少,，檢測(cè)快速且準(zhǔn)確。以下是CBA的主要技術(shù)特點(diǎn)：
1.多重檢測(cè)能力：CBA最多可同時(shí)對(duì)一個(gè)樣本中的75個(gè)目的蛋白進(jìn)行定量,，大大提高了檢測(cè)效率,，滿足了復(fù)雜樣本分析的需求。
2.樣本需求量少：僅需50μL溶液即可進(jìn)行一次檢測(cè),，這對(duì)于樣本量有限的研究具有重要意義,，減少了樣本采集的困難和成本。
3.高靈敏度,、寬檢測(cè)范圍和良好重復(fù)性：CBA的分析靈敏度高達(dá)2.8pg/mL,，檢測(cè)范圍可達(dá)0-5000pg/ml,，所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線,。這種技術(shù)通過抗體的熒光強(qiáng)度對(duì)目的蛋白定量，避免了ELISA中酶聯(lián)放大可能產(chǎn)生的假陽(yáng)性結(jié)果,，提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性,。
4.靈活的檢測(cè)對(duì)象組合：傳統(tǒng)的CBA試劑盒通常包含固定的6個(gè)指標(biāo),，形式較為固定。為了滿足不同客戶的實(shí)際需求和研究興趣,，BD公司在2005年初推出了CBA Flex Set,。這一創(chuàng)新改變了傳統(tǒng)CBA試劑盒的固定形式，使其成為自由組合,、靈活搭配的“自助餐",。研究者可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來(lái)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，最多能同時(shí)檢測(cè)75個(gè)指標(biāo),。除了繼承CBA試劑盒的優(yōu)勢(shì)外,，CBA Flex Set還配備了獨(dú)立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上直接使用96孔和384孔板進(jìn)行操作,。這種靈活性賦予了研究者更大的選擇空間,，進(jìn)一步豐富了CBA產(chǎn)品線，涵蓋了免疫,、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo),、細(xì)胞凋亡等多個(gè)領(lǐng)域的蛋白定量分析,。
5.操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力：CBA技術(shù)采用芯片式集成測(cè)定,，所有檢測(cè)只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出每種待測(cè)蛋白的濃度,。操作流程簡(jiǎn)單，整個(gè)檢測(cè)過程僅需3.5小時(shí),，可對(duì)樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)分析,，顯著縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率,，使研究人員能夠更快速地獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，加速研究進(jìn)程。
總之,，CBA技術(shù)以其多重檢測(cè)能力,、低樣本需求、高靈敏度,、寬檢測(cè)范圍,、良好重復(fù)性、靈活的檢測(cè)對(duì)象組合以及簡(jiǎn)便的操作流程等優(yōu)勢(shì),，為液相蛋白定量檢測(cè)領(lǐng)域帶來(lái)了革新,，為生物醫(yī)學(xué)研究提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持。
產(chǎn)品應(yīng)用
自CBA上市以來(lái),，越來(lái)越多的科研和臨床研究人員將CBA應(yīng)用于他們的領(lǐng)域,。CBA應(yīng)用領(lǐng)域涉及眼淚、血清,、唾液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中細(xì)胞因子、炎癥因子的水平的分析,。CBA還用于細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中磷酸化蛋白,、凋亡相關(guān)蛋白分析,，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控,，腫瘤研究，藥物對(duì)病人的治療效果評(píng)估,，藥物研發(fā),，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領(lǐng)域,。
CBA產(chǎn)品信息見下表:
| Cat.# | 產(chǎn)品描述 | 試劑盒檢測(cè)指標(biāo) |
| 557800 | Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ |
| 560485 | Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10 |
| 551287 | Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF |
| 552364 | Mouse Inflammation Kit | IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70 |
| 550026 | Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit | Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE |
| 560484 | Human Th1/Th2/Th17 Kit | IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A |
| 550749 | Human Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g |
| 551809 | Human Th1/Th2 Cytokine Kit II | IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g |
| 551811 | Human Inflammatory Cytokine Kit | IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70 |
| 552990 | Human Chemokine Kit | IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10 |
| 561418 | Human Anaphylatoxin Kit | C3A,C4A,C |
2 現(xiàn)有CBA Flex Set產(chǎn)品
| Phospho Akt1(S473) | Phospho Akt2(S474) |
| Phospho BLNK (Y84) | Phospho p120 Catenin(Y228) |
| Phospho Btk (Y551) | Phospho MEK1/2(S222) |
| Phospho eNOS (S1177) | Phospho Paxillin(Y118) |
| Phospho ERK1/2 (T202/Y204) | Phospho Pyk2(Y402) |
| Phospho Itk (Y511) | Phospho SLP-76(Y145) |
| Phospho JNK1/2 (T183/Y185) | Phospho c-jun(S63) |
| Phospho p38 (T180/Y182) | Phospho stat3 |
| Phospho PLC? (Y783) | |
| Phospho Rsk (T573) | |
| Phospho Stat1 (Y701) | |
| Phospho Syk (Y352) | |
| Phospho ZAP70 (Y319) | Human Rex-1 Flex Set |
| Total Stat1 | Human Oct-4 Flex Set |
| Total Syk | Human Nanog Flex Set |
| Total ZAP70 |
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