在生物醫(yī)學研究中，液相蛋白定量檢測是不·可或·缺的環(huán)節(jié),。然而,，傳統(tǒng)檢測技術(shù)大多只能針對單一指標進行分析，若需同時檢測多個指標,，則需大量樣本分批檢測,，操作繁瑣且各指標間差異較大。對于樣本量較少或需對比各指標的研究者而言,，傳統(tǒng)技術(shù)難以滿足需求,。例如，在細胞培養(yǎng)上清或血清中,，細胞因子含量較低,，常低于常規(guī)檢測方法的下限,，使用Western Blot等常規(guī)蛋白檢測方法難以奏效。為此,，BD-Pharmingen公司開發(fā)了一種基于流式細胞儀的液相蛋白定量技術(shù)——CBA（Cytometric Bead Array,，細胞因子微球檢測技術(shù)），為這一難題提供了有效解決方案,。
CBA技術(shù)原理CBA是一種基于流式細胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法,，可同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。BD公司借助流式細胞儀對熒光信號具有級數(shù)放大的特性,，將待測的可溶性因子附著于近似細胞直徑的微粒上,，從而實現(xiàn)對樣品中多種可溶性因子的檢測。其基本原理與ELISA相似,，通過微小,、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治"結(jié)構(gòu)的顆?！郎y物復合體所散發(fā)的熒光,，進而測定待測物的數(shù)量。
在CBA檢測過程中,，每個微球大小一致,，帶有特定熒光強度，并包被有特異性捕獲抗體,，為待測物提供類似ELISA孔板的捕獲表面,。當微球與待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體與樣品中的相應抗原或蛋白結(jié)合,，隨后加入熒光標記的檢測抗體,，形成“三明治"夾心復合物。通過流式細胞儀,，CBA可對特異性目的蛋白進行檢測,。每種微球攜帶不同強度的紅色熒光，通過流式細胞儀的FL3通道檢測微球熒光強度差異實現(xiàn)目的蛋白的定性,；檢測抗體帶有PE熒光素標記,，在FL2通道檢測，通過檢測抗體的PE熒光強度實現(xiàn)目的蛋白的定量,。
CBA技術(shù)特點CBA融合了ELISA和細胞流式技術(shù)的優(yōu)點,，是一種先進的液相蛋白檢測技術(shù)。與ELISA相比,，CBA的捕獲微球呈懸浮態(tài),，能更高效地捕獲被分析物；同時，它還具備流式細胞儀寬范圍熒光檢測的特點,，對樣本需求量少,，檢測快速且準確。以下是CBA的主要技術(shù)特點：
1.多重檢測能力：CBA最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行定量,，大大提高了檢測效率,，滿足了復雜樣本分析的需求。
2.樣本需求量少：僅需50μL溶液即可進行一次檢測,，這對于樣本量有限的研究具有重要意義,，減少了樣本采集的困難和成本。
3.高靈敏度,、寬檢測范圍和良好重復性：CBA的分析靈敏度高達2.8pg/mL,，檢測范圍可達0-5000pg/ml，所有分析只需一組標準曲線,。這種技術(shù)通過抗體的熒光強度對目的蛋白定量,，避免了ELISA中酶聯(lián)放大可能產(chǎn)生的假陽性結(jié)果，提高了檢測的準確性和可靠性,。
4.靈活的檢測對象組合：傳統(tǒng)的CBA試劑盒通常包含固定的6個指標,，形式較為固定。為了滿足不同客戶的實際需求和研究興趣,，BD公司在2005年初推出了CBA Flex Set,。這一創(chuàng)新改變了傳統(tǒng)CBA試劑盒的固定形式，使其成為自由組合,、靈活搭配的“自助餐"。研究者可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標,，最多能同時檢測75個指標,。除了繼承CBA試劑盒的優(yōu)勢外，CBA Flex Set還配備了獨立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software）,，并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上直接使用96孔和384孔板進行操作,。這種靈活性賦予了研究者更大的選擇空間，進一步豐富了CBA產(chǎn)品線,，涵蓋了免疫,、細胞信號傳導、細胞凋亡等多個領(lǐng)域的蛋白定量分析,。
5.操作簡便,，省時省力：CBA技術(shù)采用芯片式集成測定，所有檢測只需一組標準曲線即可計算出每種待測蛋白的濃度,。操作流程簡單,，整個檢測過程僅需3.5小時，可對樣本進行實時分析,，顯著縮短了檢測時間,，提高了檢測效率,，使研究人員能夠更快速地獲得實驗結(jié)果，加速研究進程,。
總之,，CBA技術(shù)以其多重檢測能力、低樣本需求,、高靈敏度,、寬檢測范圍、良好重復性,、靈活的檢測對象組合以及簡便的操作流程等優(yōu)勢,，為液相蛋白定量檢測領(lǐng)域帶來了革新，為生物醫(yī)學研究提供了強大的技術(shù)支持,。
產(chǎn)品應用
自CBA上市以來,，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應用于他們的領(lǐng)域。CBA應用領(lǐng)域涉及眼淚,、血清,、唾液、細胞培養(yǎng)上清等樣本中細胞因子,、炎癥因子的水平的分析,。CBA還用于細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白分析,，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控,，腫瘤研究，藥物對病人的治療效果評估,，藥物研發(fā),，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領(lǐng)域,。
CBA產(chǎn)品信息見下表:
| Cat.# | 產(chǎn)品描述 | 試劑盒檢測指標 |
| 557800 | Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ |
| 560485 | Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10 |
| 551287 | Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF |
| 552364 | Mouse Inflammation Kit | IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70 |
| 550026 | Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit | Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE |
| 560484 | Human Th1/Th2/Th17 Kit | IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A |
| 550749 | Human Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g |
| 551809 | Human Th1/Th2 Cytokine Kit II | IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g |
| 551811 | Human Inflammatory Cytokine Kit | IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70 |
| 552990 | Human Chemokine Kit | IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10 |
| 561418 | Human Anaphylatoxin Kit | C3A,C4A,C |
2 現(xiàn)有CBA Flex Set產(chǎn)品
| Phospho Akt1(S473) | Phospho Akt2(S474) |
| Phospho BLNK (Y84) | Phospho p120 Catenin(Y228) |
| Phospho Btk (Y551) | Phospho MEK1/2(S222) |
| Phospho eNOS (S1177) | Phospho Paxillin(Y118) |
| Phospho ERK1/2 (T202/Y204) | Phospho Pyk2(Y402) |
| Phospho Itk (Y511) | Phospho SLP-76(Y145) |
| Phospho JNK1/2 (T183/Y185) | Phospho c-jun(S63) |
| Phospho p38 (T180/Y182) | Phospho stat3 |
| Phospho PLC? (Y783) | |
| Phospho Rsk (T573) | |
| Phospho Stat1 (Y701) | |
| Phospho Syk (Y352) | |
| Phospho ZAP70 (Y319) | Human Rex-1 Flex Set |
| Total Stat1 | Human Oct-4 Flex Set |
| Total Syk | Human Nanog Flex Set |
| Total ZAP70 |
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