分
類
01 細胞轉(zhuǎn)染的分類
從導(dǎo)入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,，可將轉(zhuǎn)染分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時轉(zhuǎn)染（transient transfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動物細胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上,。瞬時轉(zhuǎn)染的基因表達是快速且短暫的,，通常只能維持幾天。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質(zhì)表達,，例如了解基因沉默,、抑制性RNA和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細胞的基因組中,，這種整合過程需要更長時間和更復(fù)雜的操作,。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的基因表達是長期且穩(wěn)定的，因為外源基因會被傳遞給子代細胞,。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于長期表達目標基因的實驗,，例如生產(chǎn)重組蛋白、進行基因敲除或敲入等研究,。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也用于藥物篩選,、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等領(lǐng)域,。
細胞轉(zhuǎn)染通?？煞譃槿愅緩椒謩e為物理介導(dǎo)、化學介導(dǎo)和生物介導(dǎo),。
物理介導(dǎo)：電穿孔法,、顯微注射和基因槍等
化學介導(dǎo)：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)技術(shù)等
生物介導(dǎo)：病毒介導(dǎo),，逆轉(zhuǎn)錄病毒,、腺病毒等
問題來了，該怎么選擇合適的轉(zhuǎn)染方法呢,？
小編對這三個途徑的常用方法進行了總結(jié),，記得給小編點個收藏hahaha~
物理介導(dǎo)——電穿孔法
原理：電流能夠擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)。
優(yōu)點：原理簡單,；不需要載體,。
缺點：需要特殊設(shè)備，電流對細胞傷害非常大,。
化學介導(dǎo)——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
原理：陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,，與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子進行包裹,，形成DNA脂復(fù)合物,，能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過細胞內(nèi)吞進入細胞,。
優(yōu)點：操作比較簡單,，轉(zhuǎn)染效率高。
缺點：需要進行條件優(yōu)化；有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染,；對血清敏感,；價格較高。
化學介導(dǎo)——陽離子聚合物
原理：與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原理相似,，都是利用陽離子與核酸結(jié)合成復(fù)合物,，利用細胞內(nèi)吞進入細胞內(nèi)。
優(yōu)點：在血清內(nèi)穩(wěn)定,；對細胞毒性相對較低,；轉(zhuǎn)染率高；性價比高,。
缺點：需要對體系進行條件優(yōu)化,；有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染。
生物介導(dǎo)——病毒感染
原理：通過侵染宿主細胞從而將外源基因?qū)氲郊毎小?/p>
優(yōu)點：高轉(zhuǎn)染率,；適用性廣,。
缺點：需要對體系進行條件優(yōu)化；需要構(gòu)建病毒載體,，步驟較為復(fù)雜,。
然而，一種方法不會適用于所有的細胞和實驗,，理想的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該根據(jù)自己的細胞類型和實驗需求來選擇。合適的細胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,，低細胞毒性和對正常生理學的影響最小,，且易于使用和可重復(fù)性等特點。
注
意
事
項
02 在轉(zhuǎn)染過程中的注意事項
細胞轉(zhuǎn)染效率往往受到很多因素的影響,，從細胞類型,、細胞培養(yǎng)條件和細胞生長狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細節(jié),，都需要考慮,，所以細胞轉(zhuǎn)染是一個常規(guī)但并不簡單的實驗。在進行轉(zhuǎn)染實驗時,，需要注意以下事項：
細胞狀態(tài)：確保細胞處于良好的生長狀態(tài),，并在轉(zhuǎn)染前處于指數(shù)生長期。
轉(zhuǎn)染試劑選擇：根據(jù)細胞類型和實驗?zāi)康倪x擇適當?shù)霓D(zhuǎn)染試劑,。
DNA/RNA質(zhì)量：使用高質(zhì)量的DNA或RNA,，并確保其大小適宜。
轉(zhuǎn)染時間：根據(jù)細胞類型和轉(zhuǎn)染試劑確定最佳的轉(zhuǎn)染時間,。
健康細胞培養(yǎng)物和操作：保持細胞健康,，避免RNA酶和其他污染源的污染。
純化RNA：在轉(zhuǎn)染前，使用適當?shù)姆椒兓疪NA,，以去除多余的核苷酸,、小的寡核苷酸、蛋白和鹽離子,。
避免RNA酶污染：確保實驗環(huán)境中沒有RNA酶,，防止對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。
重復(fù)實驗：為了確保實驗結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性,，需要進行多次重復(fù)實驗,。
轉(zhuǎn)染效率檢測：轉(zhuǎn)染完成后需要對轉(zhuǎn)染效率進行檢測，對實驗數(shù)據(jù)進行正確的分析和解釋,，避免因誤判而得出錯誤的結(jié)論,。
說到這里，小編給大家推薦一款轉(zhuǎn)染試劑,，那就是——Invitrogen的Lipofectamine™ 3000轉(zhuǎn)染試劑,。
Lipofectamine™ 3000轉(zhuǎn)染試劑采用先進的脂肪納米微粒技術(shù)，實現(xiàn)了*轉(zhuǎn)染性能,。對于多種難轉(zhuǎn)染和常見的細胞（例如 HEK293,、HeLa），該試劑在保證轉(zhuǎn)染效率的同時也提高了細胞存活率,。
Lipofectamine™ 3000轉(zhuǎn)染試劑專門針對難轉(zhuǎn)染的細胞種類進行了優(yōu)化,，能夠為廣泛的細胞種類提供越的轉(zhuǎn)染性能。其可高效轉(zhuǎn)染的細胞類型包括：
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