細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷,。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷,。
細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種,、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段,。在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要的,。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是不可少的實驗操作,。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,，細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實驗失敗,，如果沒有原始細胞的凍存,，則因為上述的意外而前功盡棄。
細胞凍存常用凍存液的成分如下：
20%血清(FBS),、10%DMSO,、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,，更可防止細胞內(nèi)冰晶形成,。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%,，然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?/div>
細胞凍存液中的作用： DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性,，分子量小,、溶解度大、易透過細胞膜,，降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,，使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,，可使冰點下降,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷,。
注意事項：
1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,，可以過濾除菌。
2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存,。
3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比),。
6
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)