當?shù)孜锇l(fā)生化學反應而產(chǎn)生的能量以光的形式釋放出來的時候,，我們稱這個過程為化學發(fā)光,。魯米諾（luminol）是常用的化學發(fā)光試劑之一,，被過氧化物氧化后它會產(chǎn)生一種激發(fā)態(tài)的產(chǎn)物——aminophthalate。這種產(chǎn)物衰變至低能態(tài)的同時釋放出光子,。添加物可以提高魯米諾反應的發(fā)光強度和持續(xù)時間以及靈敏度,。
化學發(fā)光底物被廣泛使用是因為其具有其他檢測方法不具備的優(yōu)點，這些優(yōu)點使得化學發(fā)光成為大多數(shù)蛋白實驗室檢測方法,。使用化學發(fā)光可以通過多次曝光獲得成像結(jié)果,。還可以將檢測試劑*去除，再對其他目的蛋白進行檢測并成像,，或?qū)z測條件進行優(yōu)化,。具有很寬的線性響應范圍，從而可以檢測并定量很寬濃度范圍的蛋白質(zhì),。最重要的是,，化學發(fā)光在所有的檢測方法中具有最高的靈敏度。使用辣根過氧化物酶標記的抗體和G-Biosciences公司的femtoLUCENT™ PLUS (貨號 # 786-003),，可以檢測的下限為飛克級,，而這得益于這種底物中的增強劑可以很大程度地增強發(fā)光強度并提高靈敏度。
化學發(fā)光底物與其他底物不同之處在于只有在酶和底物發(fā)生反應的時候才會產(chǎn)生瞬時的可被檢測的光,。這與那些可產(chǎn)生穩(wěn)定有顏色產(chǎn)物的底物不同,；些有顏色的沉淀在酶-底物反應結(jié)束之后仍然存在于膜上。在化學發(fā)光免疫印跡中,，底物是反應限制試劑,。一旦其耗盡，光就會逐漸變?nèi)醪⑾?。實驗中一定要使用適當稀釋濃度的抗體,，這樣才會在幾小時內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定的光信號輸出，從而維持蛋白檢測的一致性和靈敏度,。當抗體沒被足夠稀釋時，永遠不會獲得穩(wěn)定的光信號輸出,。系統(tǒng)中太多的酶會快速氧化底物并終止信號,。
化學發(fā)光，魯米諾在HRP和雙氧水存在的條件下會被氧化形成激發(fā)態(tài)的產(chǎn)物（3-aminophthalate）,。3-aminophthalate在衰變至基態(tài)的過程中會發(fā)出波長為425nm的光,。
femtoLUCENT™ PLUS
化學發(fā)光的優(yōu)點
靈敏性 | •強信號，低背景 •只需很少的抗原和抗體 |
快速 | •印跡上快速的底物處理 •信號在幾秒鐘之內(nèi)產(chǎn)生 |
穩(wěn)定 | •與放射性同位素不同,，存放期很長 •4℃儲存 |
硬拷貝結(jié)果 | •用X光膠片捕獲結(jié)果 •結(jié)果不會隨時間而褪色,，不用擔心膜的破裂 •長期保存 |
膠片結(jié)果 | •信號隨曝光時間增強而增強 •可選擇在不同時間曝光 •可優(yōu)化顯色的方法 |
印跡可重新檢測 | •非同位素標記的探針可從膜上洗掉 •可重復進行免疫檢測 |
寬線性范圍 | •可檢測很寬范圍的蛋白濃度 |
可定量 | •可用反射型顯象密度計或成像設(shè)備 （例如CCD相機）掃描X光膠片 |
華雅思創(chuàng)生物-G-Biosciences全國授權(quán)代理
華雅思創(chuàng)生物集團是多家為生命科學領(lǐng)域內(nèi)的科學研究、細胞治療和生物制藥相關(guān)人員提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務的生物高科技公司,，公司主辦的干細胞搜網(wǎng)(w w w.stemcell.so)為中國干細胞領(lǐng)域大資源庫,，網(wǎng)站提供：干細胞治療產(chǎn)品,、細胞培養(yǎng)試劑耗材、臍帶MSC間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基,、IPS細胞ES胚胎干細胞培養(yǎng)基,、DC細胞淋巴細胞無血清培養(yǎng)基、R&D細胞因子等種類豐富的產(chǎn)品,；涉及StemCell,、HY StemCell、StemRD,、CellGenix,、PeproTech、Corning,、Thermo,、Gibco、 PALL,、LONZA,、BD等國際公司品牌和生產(chǎn)廠家。以“Yes Service"核心服務理念,，緊緊圍繞“Yes Service focus on Biology 越服務 專注生物"打造中華民族全新服務體系,，我們與客戶攜手一起探索生命科學奧秘，解決人類健康問題,，發(fā)展綠色環(huán)保生態(tài),，推動世界和諧持續(xù)發(fā)展。
6
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務