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細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項
閱讀：315 發(fā)布時間：2017-12-4
細(xì)胞培養(yǎng)是將細(xì)胞在體外進(jìn)行繁殖和培養(yǎng)，該工作始于20世紀(jì)初,，現(xiàn)在已經(jīng)成為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中*的工具,，并發(fā)展成為重要的基礎(chǔ)科學(xué)之一。細(xì)胞培養(yǎng)在基礎(chǔ)研究和應(yīng)用生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域如細(xì)胞生物學(xué),、生理學(xué),、藥理學(xué)和毒理學(xué)上的應(yīng)用日益廣泛，減少了試驗動物的使用數(shù)目,，正符合3Rs理論,，即對待動物要有人性(refinement),減少實驗動物的使用量(reduction)和盡量找到使用動物的替代方法(replacement)的要求。
細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項：
1,、實驗進(jìn)行前,，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10分鐘后,，才開始實驗操作,。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染,。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺,，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個細(xì)胞株之操作,。
2,、無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品,，例如試管架,、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應(yīng)移出,，以利于氣流之流通,。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在抬面之*無菌區(qū)域,，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作,。
3、小心取用無菌之實驗物品,，避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗,。容器打開后,，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。
4、工作人員應(yīng)注意自身之安全,，須穿戴實驗衣及手套后才進(jìn)行實驗,。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少ClassII),。操作過程中,，應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生，小心毒性藥品,，例如DMSO及TPA等,，并避免尖銳針頭之傷害等,。
5、定期檢測下列項目：5.1CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度,、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,，每周更換),。5.3.無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜,，預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),，3000小時/HEPA)。6.水槽可添加消毒劑(Zephrin1:750),，定期更換水槽的水
6,、粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清)，一般在4度盡量不要超過1個月,，如在-20度存放時間可長一些,，但也不要超過3-4個月，可能對于永生化細(xì)胞株來說要求不是太高,，細(xì)胞嬌弱,，放置時間不宜過長。
7,、開紫外線照射臺的時候,，就將培養(yǎng)基、酶,、DHANKS液那到室外讓它自然升溫,。這樣40分鐘后，溫度也升上來了,。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱,。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生，有的常年不清洗,，里面很臟,，容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌。因此用它的也一定要勤換水,。從水浴鍋那出后,，找個毛巾插干上面的水。