您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
【科研明星細胞】HEK293細胞系培養(yǎng)攻略
HEK293細胞系家族歷史概覽
1973年，科學(xué)家從一個父母譜系不祥的人類流產(chǎn)胚胎的腎臟中分離出最原始的人胚腎細胞，即293細胞（human embryonic kidney (HEK) 293 cell line），該細胞被轉(zhuǎn)入修改后的5型腺病毒DNA片段，一開始轉(zhuǎn)化非常困難，一直到幾個月后，科學(xué)家得到一個穩(wěn)定的可以快速生長的293單克隆細胞株,，自此HEK293誕生。HEK293細胞在細胞生物學(xué)和生物技術(shù)中的應(yīng)用頻率僅次于第一個人類細胞系HeLa,，并衍生出數(shù)百種克隆細胞系,。SV40 large T抗原穩(wěn)轉(zhuǎn)入HEK293細胞而得到HEK293T；將HEK293馴化成能夠懸浮培養(yǎng)并且能夠耐受低鈣離子培養(yǎng)條件而獲得293S,；而293F細胞是一類能夠在無血清中高表達蛋白的野生型293細胞系,。HEK293家族如此龐大，成員的特點和應(yīng)用也大不相同：293T細胞-瞬時轉(zhuǎn)染,，蛋白表達,；293H/A細胞-噬菌斑或空斑實驗；293E細胞-重組蛋白的生產(chǎn),；293F細胞-慢病毒的生產(chǎn)和293S細胞-糖基化蛋白的表達,。小優(yōu)今天主要給大家介紹的是HEK293和HEK293T的細胞特性以及如何培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)的基本操作,，大家可以參考《從零開始-細胞培養(yǎng)入門指南》
圖1 HEK293細胞系家族歷史概覽
HEK293細胞培養(yǎng)攻略
細胞特點：
HEK293細胞既可以貼壁培養(yǎng)也可以懸浮培養(yǎng),，細胞在貼壁生長時可能呈扁平狀，懸浮生長時則呈圓形,。但多數(shù)情況下,，這類細胞采用貼壁的方式進行單層培養(yǎng)。HEK293細胞適應(yīng)酸性環(huán)境,，pH值在6.9～7.1時可順利貼壁生長,。HEK293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。其在無Ca2+或含Ca2+培養(yǎng)基中可同樣生長,，也可生長在血清濃度降低的培養(yǎng)基中,，另外，HEK293細胞培養(yǎng)基通常為高葡萄糖細胞培養(yǎng)基,。HEK293細胞可用于慢病毒包裝生產(chǎn)及滴度測定，細胞轉(zhuǎn)染,，蛋白表達驗證等試驗,。
培養(yǎng)條件（來自ATCC和中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）：
溫度：37℃
CO2：5%
完quan培養(yǎng)基配方：Eagle's Minimum Essential Medium（EMEM）+10%胎牛血清（ATCC）；
或DMEM培養(yǎng)基+10%胎牛血清（中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）
細胞形態(tài)：上皮樣，貼壁生長
傳代比例：細胞融合率達到80-90%即可傳代,，1:6-1:10,。購買后的初次傳代建議1:2。
換液頻率：2-3天
傳代周期：每周
凍存液配方：細胞完quan培養(yǎng)液+含5%/8%DMSO（v/v）或商品化凍存液
圖2：貼壁生長的HEK293低密度和高密度時的細胞照片（來自ATCC）
文中部分相關(guān)產(chǎn)品：
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 |
| MEM Eagle w/ Hanks’, L-Glutamine (Powder) (EMEM) | M3865 |
| DMEM高糖培養(yǎng)基（含 L-谷氨酰胺,，不含丙酮酸鈉,，含HEPES） | abs9499 |
| DMEM高糖培養(yǎng)基（含 L-谷氨酰胺，含丙酮酸鈉,，不含HEPES） | abs9483 |
| DMEM高糖培養(yǎng)基（含 L-谷氨酰胺,，含丙酮酸鈉，不含HEPES,，不含酚紅） | abs9276 |
| DMEM with High Glucose, with 4.0 mM L-Glutamine, with Sodium Pyruvate | SH30243.01 |
| DMEM with High Glucose, with 4.0 mM L-Glutamine, without Sodium Pyruvate | SH30022.01 |
| New Zealand FBS, 100mL | SH30406.04 |
| Australian FBS, 500ML | SV30208.02 |
| 胎牛血清（優(yōu)級） | abs972 |
| 胎牛血清（標(biāo)準(zhǔn)級） | abs974 |
| 二甲基亞砜（細胞培養(yǎng)級） | abs9187-50mL |
| 無血清細胞凍存液（科研級） | abs9417-100mL |
HEK293T細胞細胞培養(yǎng)攻略
細胞特點：
由HEK293細胞衍生而來,，是SV40 large T抗原穩(wěn)轉(zhuǎn)得到的細胞株，貼壁不牢,。293T細胞容易轉(zhuǎn)染,，用磷酸鈣、PEI或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，效率均可達90%以上,。293T細胞除了可用于各類基因表達及蛋白生產(chǎn)，還可用于高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒及其他病毒生產(chǎn),，如腺病毒及其他哺乳動物病毒,。需要注意的是，由于SV40大T抗原的存在,，該細胞對G418耐藥,，因此在使用該細胞進行試驗的時候應(yīng)避免使用G418作為抗性基因篩選。
培養(yǎng)條件（來自ATCC和中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）：
溫度：37℃
CO2：5%
完quan培養(yǎng)基配方：DMEM+10%熱滅活胎牛血清+2mM L-glutamine（來自ATCC）,；或DMEM+10%胎牛血清+1%Glutamax+1% 100 mM丙酮酸鈉溶液（來自中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）,。注意：該細胞貼壁能力較弱，培養(yǎng)時可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿,。
細胞形態(tài)：上皮樣,，貼壁生長
傳代比例：細胞融合率達到80%即可傳代，細胞生長不能過密,，過密細胞容易脫落,。傳代比例1:3-1:8。注意：細胞傳代過程中一定要注意吹散細胞,，接種密度不要過高,，否則接種后細胞聚團將很難再吹散，會形成類似球狀的聚集體貼壁生長,，培養(yǎng)條件合適的情況下細胞會逐漸攤開生長,，但若培養(yǎng)條件無法有效促進細胞貼壁,，可能會長時間呈球狀增殖。
換液頻率：2-3天
傳代周期：3-4天
凍存液配方：細胞完quan培養(yǎng)液+含5%DMSO（v/v）或商品化凍存液
圖2：貼壁生長的HEK293T低密度時的細胞照片（來自ATCC）
文中部分相關(guān)產(chǎn)品：
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 |
| L-glutamine L-Glutamine, 200 mM Solution 29.2 mg/mL L-Glutamine in 0.85% NaCl | SH30034.01 |
| L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液（100×,，200mM） | abs9295 |
| Sodium Pyruvate 100 mM Solution | SH30239.01 |
| 丙酮酸鈉溶液（100×,，100mM） | abs9296 |
HEK293細胞系培養(yǎng)F&Q
1.如果發(fā)生293T細胞不貼壁，漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象,，需確認(rèn)所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO2濃度,。并參考以下培養(yǎng)體系：
a) DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用5％CO2培養(yǎng)箱,。
b) DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制而成,，使用10％CO2培養(yǎng)箱。
當(dāng)使用碳酸氫鹽含量高的培養(yǎng)基時,，必須將這些細胞在10％CO2中孵育,，以便正確緩沖培養(yǎng)基。當(dāng)培養(yǎng)基沒有適當(dāng)緩沖時,，239T細胞雖然可以存活,，但將無法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中。
2.是否需要使用熱滅活胎牛血清,？
加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮,，細胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學(xué)研究,、培養(yǎng)胚胎干細胞,、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清,。
好啦,，工具細胞HEK293和HEK293T的培養(yǎng)攻略就到這里啦，大家想要了解更多細胞培養(yǎng)的小技巧,，可以加入我們的細胞一站式互助Club,。
上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司
試劑 | 耗材 | 儀器 | 軟件 | 定制 | 實驗服務(wù) | 供應(yīng)鏈
微信公眾平臺：優(yōu)寧維抗體專家，歡迎關(guān)注,！