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急性髓系白血病(AML)是成人中最常見的急性白血病,，其特點是骨髓(BM)和外周血中髓系前體的克隆擴增,。AML的醫(yī)療需求明顯未得到滿足,，高達50%的患者在初始化療后復發(fā),，老年患者的預后仍然很差,。

一些靶向免疫療法,，如單克隆抗體,、雙特異性T (TCE)和殺傷細胞接合分子,，以及嵌合抗原受體(CAR-T)細胞，目前正在臨床評估中,。它們靶向AML原細胞上表達的各種抗原,，其中CD33和CD123抗原是最常見的靶標。

CD123是IL-3受體(IL-3Rα)的α鏈,，在AML中經(jīng)常高水平表達,，主要表達于白血病干細胞或祖細胞，與預后不良相關,。在一些臨床試驗中,，靶向CD123的細胞毒抗體顯示出有限的抗白血病活性，即使是經(jīng)過特異性設計以增加抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。相比之下,，TCE分子和CAR-T細胞具有一定的臨床療效,，但也具有高毒性，這證實了替代靶向方法的必要性,。

在這種情況下,，基于NK細胞的治療可能為靶向AML細胞提供新的治療視角和更安全的替代方案，沒有T細胞治療常見的并發(fā)癥,，如細胞因子釋放綜合征或神經(jīng)毒性,。由于NK細胞的wan全激活需要不同激活受體的協(xié)同作用，作者開發(fā)了一種基于抗體的NK細胞接合器(NKCE)技術,，用于生成針對癌細胞上表達的抗原的三功能分子(NKp46-CD16a-NKCEs),，并在NK細胞上協(xié)同NKp46和CD16a，如下圖,。NKp46 (NCR1, CD335)是一種在哺乳動物中高度保守的活化細胞表面糖蛋白,。NKp46在所有NK細胞、ILC1和非常小的T細胞和ILC3亞群上表達,。NKp46信號通過與CD3ζ和FcRγ的關聯(lián)介導NK細胞活化,、細胞毒性和細胞因子釋放。

主要結(jié)果部分：

●在AML細胞上表達的CD64抑制抗CD123抗體的ADCC活性,，由于CD64可與抗體Fc片段發(fā)生互作

●CD123-NKCE對AML細胞具有較強的細胞毒活性

●在體內(nèi)CD123-NKCE控制AML腫瘤生長

●與CD123-TCE相比,，CD123-NKCE介導人外周血單核細胞的藥效學效應，細胞因子釋放可以忽略不計

結(jié)果具體介紹：

1.首先驗證了在AML細胞上表達的CD64抑制抗CD123抗體的ADCC活性

作者對來自7組樣本的AML原代細胞進行抗CD123的抗體處理,，發(fā)現(xiàn)抗cd123抗體(CD123-IgG1+)介導了來自患者(前3組)約一半樣本的原細胞的殺傷,，但對來自另一部分（后4組）樣本的細胞幾乎沒有活性a。因此將樣本分為兩組:CD123-IgG1+應答者和CD123-IgG1+無應答者,。同時也說明這兩組之間的差異不能簡單地用CD123表達的差異來解釋,。流式實驗發(fā)現(xiàn)兩組之間的一個顯著差異是，在CD123-IgG1+應答者的AML母細胞中不存在FcγR表達,，而在CD123-IgG1+無應答者的細胞中存在FcγR表達,，后者的細胞表達CD32和/或CD64 b。進一步的實驗及分析發(fā)現(xiàn)CD64在ADCC耐藥中起主導作用,，因為CD123-IgG1+殺傷活性只有在缺乏CD64表達的情況下才能恢復,。這些結(jié)果支持了一種假設，即高親和力FcγR CD64在靶細胞表面順式捕獲抗體Fc可能與NK細胞上與CD16a的反式結(jié)合競爭,，從而干擾了ADCC c,。

2. CD123-NKCE對AML細胞具有較強的細胞毒活性

與細胞毒性抗體不同，NKCE分子參與NKp46可以以不依賴CD16a的方式促進NK細胞的細胞毒性,。作者探索了NKCE分子是否僅結(jié)合NKp46或同時結(jié)合NKp46和CD16a,，可以誘導NK細胞介導的殺傷表達CD64的AML靶細胞。在AML細胞上生成靶向CD123的NK細胞接合分子,，接合NKp46 (NKp46- fc null-CD123),，或接合NKp46和CD16a (NKp46- fc -CD123: CD123- NKCE) a, b。正如已經(jīng)描述的其他靶抗原和癌癥一樣,，靶向CD123的雙功能NKp46-NKCE在體外對MOLM-13 AML細胞系具有很強的抗腫瘤作用b,。隨后驗證了CD123-NKCE對NK細胞具有較強的活化作用，且無脫靶效應,。

3. CD123-NKCE調(diào)控AML腫瘤在體內(nèi)的生長

接下來,，作者評估了三功能CD123-NKCE在靜脈注射MOLM-13腫瘤細胞誘導的異種彌散性AML腫瘤模型中的體內(nèi)療效a。在第一天時進行腫瘤異種移植,，一天后分別進行vehicle, CD123-IgG1+, CD123-NKCE處理,，發(fā)現(xiàn)CD123-NKCE小組顯著提升了小鼠存活率b。通過抗asialogm1抗體處理小鼠NK細胞(anti-asialoGM1抗體可使NK細胞耗竭),，在該模型中wan全消除了CD123-NKCE的功效,，證實了NK細胞在體內(nèi)三功能NKCE分子的抗腫瘤活性中的主要作用c, d。

4. 與CD123-TCE相比,，CD123-NKCE的優(yōu)勢

強細胞毒性可能與患者的毒性有關,。因此，作者在體外測量了CD123-NKCE誘導的人外周血單個核細胞(PBMCs)的細胞因子釋放,，并將結(jié)果與靶向相同抗原的CD3 T細胞接合抗體工具(CD123-TCE)的結(jié)果進行了比較,。健康供者在CD123-NKCE或CD123-TCE存在下培養(yǎng)PBMC約20 h，然后對IL-6,、IL-1β,、TNF-α和IFN-γ的分泌進行定量，發(fā)現(xiàn)CD123-NKCE誘導的細胞因子釋放水平比CD123-TCE低得多a,。另CD123在循環(huán)嗜堿性細胞和漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)的一個亞群上表達,，鑒于人PBMC中pDCs的豐度較低，將重點放在嗜堿性細胞上,，并通過流式細胞術在同一實驗中監(jiān)測該細胞的消耗,，CD123-NKCE治療PBMC促進了CD123+嗜堿性粒細胞的劑量依賴性耗竭b。CD123-NKCE對NK細胞的激活和募集與CD123+細胞耗竭的藥效學效應有關,但在高達10 μg/ml劑量(68 nM)時,，沒有明顯的促炎細胞因子釋放,，這表明NKCE在治療AML方面比TCE具有更好的效果c。

總之,，作者在此報告了一種新的基于抗體的NK細胞接合技術CD123-NKCE的臨床前開發(fā),，該技術將靶向于惡性細胞的CD123，并將CD16a和NKp46協(xié)同作用于NK細胞,。具有不可替代的優(yōu)勢：

●解決了基于單抗的ADCC抑制,；

●通過與NKp46結(jié)合,，CD123-NKCE特異性靶向NK細胞并增強NK細胞活性；

●相較于TCE不會引起明顯的促炎因子釋放具有更好的安全性,。

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