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近期很多老師發(fā)圖咨詢細胞培養(yǎng)時背景的“顆粒"是不是污染,，如何去除，今天這篇文章小編帶大家全面解析細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的“顆粒"問題。細胞培養(yǎng)中常見的“顆粒"可分為胞內(nèi)和胞外兩種,，下面兩張圖可以直觀地向大家展示：

很多老師因為不清除這些“顆粒"的來源,，害怕污染而將細胞丟棄，不僅浪費心力,，還耽誤實驗進度,，接下來我們逐步分析這些“顆粒"如何產(chǎn)生。

• 細菌或真菌污染

真菌污染相對來說比較好鑒別,，一般肉眼可見培養(yǎng)基上層漂浮的霉斑或顯微鏡下可見菌體,，細菌的菌體相對較小，顯微鏡下呈棒狀,、球狀或者桿狀,，由于細菌增值產(chǎn)生酸性物質(zhì)，短期內(nèi)培養(yǎng)基變黃,，渾濁,，細沙狀沉淀。

• 細胞碎片

消化不當或者PH,、滲透壓,、溫度的變動可能引起細胞死亡，產(chǎn)生碎片,，如何對細菌和細胞碎片辨別有困難的老師，可以登錄愛必信-產(chǎn)品資訊處或者關(guān)注愛必信公眾號查看往期文章,。

• 凋亡小體

程序性死亡細胞的核DNA在核小體連接處斷裂成核小體片段,，形成濃縮的染色質(zhì)塊。隨著染色質(zhì)不斷聚集,，核膜在核孔處斷裂,，形成核碎片。同時由于不斷脫水,，細胞質(zhì)不斷濃縮,，細胞體積減小。整個細胞通過發(fā)芽,、起泡等方式形成一個球形的突起,，并在其根部絞窄而脫落形成一些大小不等，內(nèi)含胞質(zhì),、細胞器及核碎片的小體稱為凋亡小體,。

• 支原體集落

支原體無細胞壁，直徑為0.1-0.3μm,，且形態(tài)易變,，極易通過除菌過濾器，單個的支原體無法顯微鏡觀察,，目前已知的主要污染源是動物血清,、胰酶和已污染培養(yǎng)物的氣溶膠,。來源廣泛、不易過濾,、難以觀察,，給細胞培養(yǎng)帶來了極大隱患。單個的支原體無法從顯微鏡下觀察,，支原體集落卻可以被捕捉到,。

• 黑膠蟲

談到黑膠蟲，大家應(yīng)該都對他神秘的“身世"有印象,，目前多數(shù)黑膠蟲被鑒定為細菌,，黑膠蟲明顯的特征是運動，但是這里小編要提醒大家,，支原體集落,，可能也會出現(xiàn)運動的現(xiàn)象，詳細的講述可以查看往期文章,。

• 血清中的物質(zhì)

血清反復(fù)凍融或者經(jīng)過滅活后,，可能會產(chǎn)生“小黑點"，此外不要認為會增多的一定是微生物污染,，血清質(zhì)量不好,，影響細胞生長，衰老細胞增多形成細胞碎片,，也會呈現(xiàn)細胞長勢不佳,，黑點增多的現(xiàn)象。

經(jīng)過分析,，許多老師肯定又覺得混亂,，細胞培養(yǎng)遇到“顆粒"到底如何應(yīng)對？

首先,，如果是微生物污染,，不重要或者可替代的細胞，我們都建議丟棄,，并排查污染來源,，被污染的試劑也要丟棄，并且對使用的儀器和環(huán)境進行除菌,，比較重要的細胞,，可以用含抗生素的緩沖液清洗過后，使用含較高濃度雙抗或三抗培養(yǎng),，嘗試消除,，對于支原體和黑膠蟲污染，使用相應(yīng)的支原體清除劑和黑膠蟲清除劑進行處理。

其他情況我們建議優(yōu)先排查血清質(zhì)量,，特別是更換血清批次的,，選擇質(zhì)量好的血清也是細胞培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵所在，除非實驗特殊要求,，其他情況下,，不建議對血清進行滅活處理。而細胞正常凋亡產(chǎn)生的碎片,，可以低俗離心分離完整細胞和細胞碎片,，參考條件為300-500rpm 3min，根據(jù)實際情況進行調(diào)整,，可以用緩沖液清洗幾次,。

最后需要注意的是某些細胞正常培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)一些“顆粒"物質(zhì)，屬于正?，F(xiàn)象在,，老師們一定要多查閱資料，熟悉培養(yǎng)細胞的特性,。

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