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近期很多老師發(fā)圖咨詢細(xì)胞培養(yǎng)時背景的“顆粒"是不是污染，如何去除,，今天這篇文章小編帶大家全面解析細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的“顆粒"問題,。細(xì)胞培養(yǎng)中常見的“顆粒"可分為胞內(nèi)和胞外兩種，下面兩張圖可以直觀地向大家展示：

很多老師因為不清除這些“顆粒"的來源,，害怕污染而將細(xì)胞丟棄,，不僅浪費心力,，還耽誤實驗進(jìn)度，接下來我們逐步分析這些“顆粒"如何產(chǎn)生,。

• 細(xì)菌或真菌污染

真菌污染相對來說比較好鑒別,，一般肉眼可見培養(yǎng)基上層漂浮的霉斑或顯微鏡下可見菌體，細(xì)菌的菌體相對較小,，顯微鏡下呈棒狀,、球狀或者桿狀，由于細(xì)菌增值產(chǎn)生酸性物質(zhì),，短期內(nèi)培養(yǎng)基變黃,，渾濁，細(xì)沙狀沉淀,。

• 細(xì)胞碎片

消化不當(dāng)或者PH,、滲透壓、溫度的變動可能引起細(xì)胞死亡,，產(chǎn)生碎片,，如何對細(xì)菌和細(xì)胞碎片辨別有困難的老師，可以登錄愛必信-產(chǎn)品資訊處或者關(guān)注愛必信公眾號查看往期文章,。

• 凋亡小體

程序性死亡細(xì)胞的核DNA在核小體連接處斷裂成核小體片段,，形成濃縮的染色質(zhì)塊。隨著染色質(zhì)不斷聚集,，核膜在核孔處斷裂,，形成核碎片。同時由于不斷脫水,，細(xì)胞質(zhì)不斷濃縮,，細(xì)胞體積減小。整個細(xì)胞通過發(fā)芽,、起泡等方式形成一個球形的突起,，并在其根部絞窄而脫落形成一些大小不等，內(nèi)含胞質(zhì),、細(xì)胞器及核碎片的小體稱為凋亡小體,。

• 支原體集落

支原體無細(xì)胞壁，直徑為0.1-0.3μm,，且形態(tài)易變,，極易通過除菌過濾器，單個的支原體無法顯微鏡觀察,，目前已知的主要污染源是動物血清,、胰酶和已污染培養(yǎng)物的氣溶膠。來源廣泛,、不易過濾,、難以觀察,，給細(xì)胞培養(yǎng)帶來了極大隱患。單個的支原體無法從顯微鏡下觀察,，支原體集落卻可以被捕捉到,。

• 黑膠蟲

談到黑膠蟲,，大家應(yīng)該都對他神秘的“身世"有印象,，目前多數(shù)黑膠蟲被鑒定為細(xì)菌，黑膠蟲明顯的特征是運動,，但是這里小編要提醒大家,，支原體集落，可能也會出現(xiàn)運動的現(xiàn)象,，詳細(xì)的講述可以查看往期文章,。

• 血清中的物質(zhì)

血清反復(fù)凍融或者經(jīng)過滅活后，可能會產(chǎn)生“小黑點",，此外不要認(rèn)為會增多的一定是微生物污染,，血清質(zhì)量不好，影響細(xì)胞生長,，衰老細(xì)胞增多形成細(xì)胞碎片,，也會呈現(xiàn)細(xì)胞長勢不佳，黑點增多的現(xiàn)象,。

經(jīng)過分析,，許多老師肯定又覺得混亂，細(xì)胞培養(yǎng)遇到“顆粒"到底如何應(yīng)對,？

首先,，如果是微生物污染，不重要或者可替代的細(xì)胞,，我們都建議丟棄,，并排查污染來源，被污染的試劑也要丟棄,，并且對使用的儀器和環(huán)境進(jìn)行除菌,，比較重要的細(xì)胞，可以用含抗生素的緩沖液清洗過后,，使用含較高濃度雙抗或三抗培養(yǎng),，嘗試消除，對于支原體和黑膠蟲污染,，使用相應(yīng)的支原體清除劑和黑膠蟲清除劑進(jìn)行處理,。

其他情況我們建議優(yōu)先排查血清質(zhì)量，特別是更換血清批次的,，選擇質(zhì)量好的血清也是細(xì)胞培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵所在,，除非實驗特殊要求,，其他情況下，不建議對血清進(jìn)行滅活處理,。而細(xì)胞正常凋亡產(chǎn)生的碎片,，可以低俗離心分離完整細(xì)胞和細(xì)胞碎片，參考條件為300-500rpm 3min,，根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整,，可以用緩沖液清洗幾次。

最后需要注意的是某些細(xì)胞正常培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)一些“顆粒"物質(zhì),，屬于正?，F(xiàn)象在，老師們一定要多查閱資料,，熟悉培養(yǎng)細(xì)胞的特性,。

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