數(shù)字PCR（dPCR）是一種核酸絕對定量的技術，與傳統(tǒng)的熒光定量PCR技術（qPCR）相比,，dPCR擁有可以精確到單個核酸分子的高精準度,、適合復雜樣本的高便捷度,、且無需標準曲線或參照基因進行對比分析等特點。因此,，高靈敏度,、絕對定量、高穩(wěn)定性和更高的抗干擾能力成為數(shù)字PCR的4大優(yōu)勢,。

作為最常見的腫瘤之一,，胃癌(GC)具有高死亡率，因為當前的檢查方法不能實現(xiàn)早期診斷,。核粒梭菌(Fn)主要定居在口腔中,，據(jù)報道與胃腸道腫瘤的發(fā)展有關。迄今為止,，關于唾液Fn和胃癌之間的關系知之甚少,。該篇來自山東大學齊魯醫(yī)院文章確定唾液Fn能否作為診斷胃癌的生物標志物，并探討Fn對胃癌細胞的影響,。

實驗方法：通過液滴數(shù)字聚合酶鏈反應對2019年1月至2020年12月山東大學齊魯醫(yī)院的120例GC患者,、31例wei縮性胃炎(AG)患者、35例非AG (NAG)患者,、26例胃息肉(GP)患者和20例正常對照(NC)的唾液中Fn的豐度進行定量,。進行受試者工作特征(ROC)曲線分析，以評估Fn以及傳統(tǒng)血清腫瘤標志物(包括癌胚抗原(CEA),、糖類抗原(CA) 19-9和CA72-4)的診斷價值,。Transwell實驗和傷口愈合實驗評估Fn感染對GC細胞的影響。western blot法檢測上皮間質轉化(EMT)標記物的表達,。

★實驗流程：

• 研究人員的樣本收集,，120例GC患者、31例wei縮性胃炎(AG)患者,、35例非AG (NAG)患者,、26例胃息肉(GP)患者和20例正常對照(NC)的唾液樣本的收集，離心后儲存在-80℃,。

• 使用凱杰QIAamp Blood Mini Kit試劑盒提取200ul唾液樣本中的基因組DNA,，濃度用Qubit 3熒光計測定。

• 使用上海小海龜數(shù)字PCR儀進行Fn的測定,，設計Fn的探針進行檢測,。

• GC細胞的培養(yǎng)，F(xiàn)n的菌株培養(yǎng)

• 將GC細胞和Fn的菌株共培養(yǎng),，進行感染

• 將感染后的GC細胞進行Transwell分析

• 傷口愈合實驗,，感染后的GC細胞進行Transwell分析，感染后用200 μL的移液管jian端進行直線刮擦,，模擬傷口,，隨后，除去培養(yǎng)基和漂浮細胞,，用無血清培養(yǎng)基代替,，并捕獲圖像,。細胞培養(yǎng)48小時后，再次拍攝圖像,。

• Western blot分析,，將感染Fn和未感染Fn的GC細胞裂解進行Western blot分析

實驗結果：核粒梭菌(Fn)是一種牙周致病菌，常見于胃腸道腫瘤組織中,。在此,，研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者唾液Fn水平升高，可作為胃癌診斷的潛在生物標志物,，其診斷能力優(yōu)于傳統(tǒng)的血清腫瘤標志物,。研究還發(fā)現(xiàn)唾液Fn水平與胃癌TNM分期和淋巴結轉移呈正相關。此外,，實驗在試管內揭示了Fn通過促進上皮-間質轉化過程來促進GC細胞的遷移和侵襲,。該發(fā)現(xiàn)表明唾液Fn是診斷胃癌的潛在生物標志物。該研究表明唾液中Fn含量可作為診斷胃癌的生物標志物,，F(xiàn)n感染可通過加速上皮間質轉化過程促進胃癌轉移,。

該篇研究用的是小海龜數(shù)字PCR儀設備進行Fn數(shù)字PCR檢測。上海小海龜科技有限公司立足于基因檢測上游儀器,、芯片耗材與試劑開發(fā)的高新技術企業(yè),，其以微流控芯片技術為核心，已成功推出BioDigital 青數(shù)字PCR分體機,、以及BioDigital • 炎和SCI Digital系列數(shù)字PCR全自動一體機,，實現(xiàn)了基因檢測與分子診斷前沿技術領域的重大原始材料科技創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)化突破。

BioDigital 青--真正的液滴制備全自動PCR

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性能特點：

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• 平臺開放：可兼容第三方qPCR Mix

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