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我們辛辛苦苦養(yǎng)好的類(lèi)器官,，該如何做鑒定呢,？通常是HE染色和免疫組化染色。今天小編帶大家了解一下類(lèi)器官如何進(jìn)行包埋及HE染色,。

一,、類(lèi)器官收集

1、類(lèi)器官收集（例如24孔板,，收集1-2孔類(lèi)器官,，大約200-500個(gè)類(lèi)器官）
2、4℃靜置 10min,，離心棄去大部分上清

二,、瓊脂糖凹槽制備
1、稱(chēng)量0.2至0.4g瓊脂糖,，加入至燒杯或者小試劑瓶?jī)?nèi)
2,、加入10mL左右PBS
3、微波爐高火融化,，每隔5s暫停打開(kāi),，觀察，重復(fù)數(shù)次至瓊脂糖融化完
4,、取約200uL融化瓊脂糖,，加入至600uL 1.5ml EP管內(nèi)（如下圖所示）
5、在盛有瓊脂糖的1.5ml EP管內(nèi)插入一小0.5ml EP管,，使瓊脂糖形成一圓尖底凹槽,，室溫或者4℃冰箱靜置數(shù)分鐘，至瓊脂糖凝固,，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)小0.5ml EP管,，取出0.5ml EP管，可看到瓊脂糖內(nèi)形成一個(gè)深圓尖底槽。
6,、吸取類(lèi)器官沉淀置于凹槽底部,，盡量包埋在中間位置。
7,、加入PBS至高于瓊脂糖槽的邊緣,。

三、類(lèi)器官固定

四,、類(lèi)器官包埋
1,、脫水：取出已凝固的含有類(lèi)器官沉淀的瓊脂糖塊，在梯度乙醇中脫水,，70%,、80%、90%和95%乙醇各1h,，100%乙醇30min，待其凝固,；
2,、融蠟：提前4h左右打開(kāi)烘箱，65℃溶蠟,；
3,、透明：將脫水完成后的瓊脂糖塊轉(zhuǎn)移至組織包埋盒中（二甲苯處理前需一直浸泡在無(wú)水乙醇中），將包埋盒轉(zhuǎn)移至二甲苯中5min處理兩次,；注：因二甲苯有毒性,，需在通風(fēng)良好區(qū)域進(jìn)行操作，取出時(shí)盡量瀝盡殘留二甲苯,。
4,、浸蠟：透明化處理完成后立即轉(zhuǎn)入已經(jīng)融化的蠟缸中，60℃浸蠟2h后,，更換新的蠟缸再次浸蠟2h,；
5、包埋：包埋在冰盒上進(jìn)行,，將融好的純蠟倒入蠟盒三分之一處,，將瓊脂塊放置于中間位置，然后再滴蠟包埋直到倒?jié)M,。待蠟塊全凝固后,，小心脫下模具。

五,、類(lèi)器官HE染色
1,、石蠟切片脫蠟至水
依次將切片放入二甲苯I 10min；二甲苯Ⅱ10min；無(wú)水乙醇Ⅰ5min,；無(wú)水乙醇Ⅱ5min,；95%酒精5min；90%酒精5min,；80%酒精5min,；70%酒精5min；蒸餾水洗,。
2,、蘇木素染細(xì)胞核
切片入Harris蘇木素染3-8min，自來(lái)水洗,。
3,、伊紅染細(xì)胞質(zhì)
切片入伊紅染液中染色1-3min，自來(lái)水洗,。
4,、脫水封片
將切片依次放入95%酒精I(xiàn) 5min ；95%酒精I(xiàn)I 5min,；無(wú)水乙醇Ⅰ5min ,；無(wú)水乙醇Ⅱ5min ；二甲苯Ⅰ5min ,；二甲苯Ⅱ5min中脫水透明,，將切片從二甲苯拿出來(lái)稍晾干，中性樹(shù)膠封片,。
5,、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析

六,、類(lèi)器官鑒定-HE染色結(jié)果（以肺癌為例）

人肺癌類(lèi)器官

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