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多重?zé)晒饷庖呓M化Q&A——第一彈
Q：我想要進(jìn)行多色實(shí)驗(yàn),，對于我的樣本有什么要求嗎,？
A：您按照免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)對您的樣本進(jìn)行前處理即可,。如果是從歷史切片或者蠟塊中挑選用來做多色，請盡量選取相對較新的樣本（一個(gè)月內(nèi)）,，最長不要選保存超過半年的樣本,，可能會有靶點(diǎn)缺失或者強(qiáng)非特異性，導(dǎo)致染色效果欠佳,。
附上石蠟切片樣本處理推薦：
取新鮮組織（理想的取材厚度是0.2cm~0.3cm）,，如取的組織過大，需要切小后再做固定,，以免組織太厚固定液滲透不良,，導(dǎo)致后續(xù)染色效果不佳
組織離體后（不要超過30分鐘）迅速轉(zhuǎn)移到固定液中（一般選用10%中性福爾馬林或4%多聚甲醛），在常溫條件下固定時(shí)間為18-24小時(shí),，不要固定太長時(shí)間,，容易導(dǎo)致組織抗原丟失，影響陽性信號顯色,。
浸蠟溫度應(yīng)控制在58~60℃左右,，浸蠟用的石蠟應(yīng)經(jīng)常更換,，以減少石蠟中二甲苯的含量。高溫下的二甲苯容易使組織發(fā)脆,，細(xì)胞收縮,，容易導(dǎo)致后續(xù)染色過程中組織脫片。
切片厚度最佳為4微米,，組織太厚容易導(dǎo)致染料滲透不加,，且多層細(xì)胞之間熒光發(fā)生串?dāng)_，影響成像觀察,。貼片需選用免疫組化專用的防脫載玻片,，不要在水浴撈片環(huán)節(jié)添加任何粘合劑，撈片后豎直置于吸水紙上去除水分,，輕敲去除水滴,，不要用紙擦拭玻片。
切片在45℃~65℃烤箱中烤片30-60分鐘左右,，到干片為止,，否則后續(xù)染色過程中易脫片。但需要注意溫度過高或時(shí)間過長均會影響抗原的活性,，因?yàn)樵诟邷馗稍飾l件下會加速組織切片中抗原的氧化,。
Q：如果我的樣本是冰凍切片或者細(xì)胞爬片，可以用來做多色實(shí)驗(yàn)嗎,？
A：可以的,，多色實(shí)驗(yàn)本身不局限您的樣本類型，但需要注意的是您的切片或者爬片能否經(jīng)得起多輪抗體洗脫,，在樣本不脫片的情況下,，才能有一個(gè)比較好的染色效果。如果您是這類樣本,，您需要額外準(zhǔn)備一瓶抗體洗脫液（abs994）,，替代多色實(shí)驗(yàn)中的熱修復(fù)步驟，采用溫和的洗脫方式,，避免高溫高壓破壞切片,。需要注意的是，您依舊需要控制切片厚度,，盡量保證在單層細(xì)胞的厚度,，如太厚，多層細(xì)胞之間發(fā)生重疊,，熒光信號會發(fā)生串?dāng)_,。
（PS：石蠟切片是適合做多色實(shí)驗(yàn)的樣本類型！）
Q：我該如何選擇用于做多色的抗體呢？
A：多色這項(xiàng)技術(shù)突出的一個(gè)優(yōu)勢就在于對一抗種屬沒有特殊的限定,，根據(jù)樣本種屬選擇即可,，我們試劑盒本身配備了二抗（鼠兔通用二抗或者抗兔二抗），您在選取一抗來源的時(shí)候,，盡可能選擇兔子或者小鼠來源的一抗,，如確實(shí)找不到鼠或兔來源的一抗也沒有關(guān)系，您只需要再準(zhǔn)備一個(gè)跟該一抗來源適配的能用于免疫組化的HRP二抗即可,。另外,，您的一抗需要能應(yīng)用于IHC，并且盡量選擇單克隆抗體,，多抗往往容易產(chǎn)生非特異性,。
Q：我注意到你們多色試劑盒中也是熒光染料，我在操作過程中需要額外避光嗎,？
A：不用的,，您在常規(guī)日光燈環(huán)境下操作就可以，我們?nèi)玖系臒晒鈴?qiáng)度很高,，不會那么容易淬滅,，但涉及到需要孵育或者保存的時(shí)候還是建議您采用避光濕盒進(jìn)行。
Q：我今天做好了多色片子,，但無法立即進(jìn)行掃描觀察,，我該怎么保存呢,？
A：染好的多色片子可以避光在4℃條件下保存較長的時(shí)間,，但我們建議您完成染色以后，在兩周內(nèi)完成成像,，并且如果需要長時(shí)間保存,，建議您用透明指甲油對蓋玻片邊緣進(jìn)行密封。如保存時(shí)間過長,，或保存不當(dāng),，封片劑容易干掉，此時(shí)再成像會有較強(qiáng)非特異性,，可以使用PBS把蓋玻片洗下來,，重新封片以后再觀察，但成像效果依舊會打折扣,，還是建議您盡快完成成像,。
（PS：雖然熒光染料沒有那么容易淬滅，但若多次成像反復(fù)激發(fā),，依舊會淬滅,，2-3次影響不會很大，但不排除偶然性哦）
Q：整個(gè)多色實(shí)驗(yàn)一般需要多久能夠完成呀？一天能行嗎,？
A：如果您的指標(biāo)比較少（2~3個(gè)指標(biāo)）,，恰好您又是“肝帝"愿意熬夜做實(shí)驗(yàn)，那么一天是可以做完的哦,，因?yàn)槲覀兌嗌玖嫌行盘柗糯蟮墓δ?，且試劑盒搭配的二抗是多聚的HRP二抗，也能放大信號,，因此原本需要4℃過夜的一抗孵育,，可以在室溫1小時(shí)，或者37℃烘箱一小時(shí)完成,，滿打滿算一天是可以做完實(shí)驗(yàn)的,。但如果您不想要這么“肝"，當(dāng)然可以,，您只需要在一抗孵育的步驟選擇4℃過夜,，第二天再來繼續(xù)做二抗孵育等后續(xù)操作就行，跟您做IHC實(shí)驗(yàn)一樣,，當(dāng)您指標(biāo)比較多的時(shí)候,，可以合理安排，部分抗體室溫1小時(shí),，部分抗體4℃過夜,，但也不可把“戰(zhàn)線"拉得太長，控制在盡可能短的時(shí)間完成實(shí)驗(yàn),，畢竟遲則生變哦,。
還在為搭配不同種屬一抗而發(fā)愁？
還在為指標(biāo)太多而苦惱,？
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| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨期 |
| abs50012 | 四色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50028 | 四色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50013 | 五色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50029 | 五色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50014 | 六色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50030 | 六色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50015 | 七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50031 | 七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50037 | 七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（plus）（鼠兔通用二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs50038 | 七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（plus）（抗兔二抗） | 20T/100T | 現(xiàn)貨 |
| abs994 | 抗體洗脫液（mIHC專用） | 30ml | 現(xiàn)貨 |
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Absin精選抗體庫，自由組合panel!
| 人 | 小鼠 |
| T細(xì)胞：CD3,、CD4,、CD8,、FOXP3、CD45,、CD103 | T細(xì)胞：CD3,、CD4、CD8,、FOXP3,、CD45 |
| 巨噬細(xì)胞：CD68、CD163,、CD206,、CD86 | 中性粒細(xì)胞、B細(xì)胞：LY6G,、CD11c,、CD20、CD19 |
| 免疫檢查點(diǎn)：PD-1,、PD-L1,、HLA-DR、TIM-3,、GZMB,、CD24、LAG-3 | 巨噬細(xì)胞：F4/80,、CD68,、CD86、CD11b,、CD163,、M-CSF |
| 成纖維細(xì)胞：α-SMA | 腫瘤相關(guān)：SHP-2 |
| 腫瘤相關(guān)：Ki-67、PANCK,、VEGF | 白介素：IL-4,、IL-10,、IL-13 |
| NK細(xì)胞：CD56 | 免疫檢查點(diǎn)：GZMB,、PD-1、PD-L1 |
| B細(xì)胞：CD20,、CD19 | NK細(xì)胞：NKR-P1C（NK1.1） |
| 中性粒細(xì)胞：CD11c | 信號通路相關(guān)：Arrestin-C,、iNOS |
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