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如何快速啟動siRNA文庫篩選

閱讀:436        發(fā)布時間:2023-1-31

客戶:小刀,我之前有聽過你的siRNA文庫講座,,還挺感興趣的
客戶:但是我們實(shí)驗(yàn)室沒有高通量儀器,,也可以做siRNA文庫篩選嗎?會不會太麻煩?
DAO:不會很麻煩,,小幾十個基因的篩選排槍就能搞定,高通量儀器一般適用于幾百,、幾千或幾萬個基因的篩選


客戶:之前沒做過siRNA篩選,,我有點(diǎn)怕我操作不好
DAO:這個不用太擔(dān)心,基本的轉(zhuǎn)染操作和單基因一致,,只不過通常是用96孔細(xì)胞板進(jìn)行,,所以需要多些細(xì)心和耐心


客戶:好的,那我可以試試看
客戶:對了,,你講座中提到的成品文庫,,我看了下,這些基因家族分類和我想要研究的方向不能夠完mei匹配呢
DAO:你說的是這些亞庫嘛,?
 
DAO:這個問題不大,,圖中所有文庫的基因列表我都有,你可以看看你的研究方向和哪套庫靠的上,,然后挑選自己喜歡的基因進(jìn)行定制,。又或者你自己有想要研究的一些基因,可以直接發(fā)我,,畢竟只要有5個基因就能定制文庫了,,價(jià)格還劃算


客戶:能定制還蠻不錯的,那我來看看能不能湊些基因出來給你
客戶:但是定制的規(guī)格,、產(chǎn)品形式又是什么樣的,?是不是和成品不一樣啊,?
DAO:基本是一樣的,但是定制更靈活:規(guī)格上有0.1, 0.25, 0.5, 1, 2 nmol 5種可選,,siRNA你可以選擇4條分裝的,,也可以選擇SMARTpool形式的


客戶:等等等,什么叫4條分裝,,SMARTpool又是什么,?
DAO:哈哈,講座沒認(rèn)真聽吧,,是這樣的,,每個基因我們會提供4條不同的siRNA,4條分裝就是每條siRNA單獨(dú)放1個孔里,,那SMARTpool就是把4條siRNA預(yù)混后共同放在1個孔里


客戶:那我要怎么選?。磕姆N更合適呢,?
DAO:做多個基因篩選的話,,我是更建議選SMARTpool的,,這樣你的轉(zhuǎn)染工作量就減少了3/4,而且SMARTpool沉默效果更好,,畢竟4條不同的siRNA共同發(fā)揮作用,,大哥不行還有二哥、三哥和四哥呢


客戶:那沉默效率怎樣,?有沒有做過驗(yàn)證?。咳f一效果不好怎么辦,?
DAO:這個可以放心,,所有的siRNA出廠前都有做過驗(yàn)證,而且是有沉默效率保障的,,保證每個基因?qū)?yīng)的4條siRNA中至少有3條在mRNA水平上有≥75%的沉默效率,,如果效果不好,提供陰陽性對照,、siRNA的qPCR數(shù)據(jù),,廠家是會賠付的


客戶:OKK,那這個規(guī)格我咋選呢,,我是想買個0.1nmol的,,但是具體能做幾次篩選我有點(diǎn)慌?
DAO:和我想到一起去了,,如果只是利用文庫做一下基因的初篩,,那0.1nmol就很夠用了
DAO:關(guān)于能做幾次篩選,這個取決于你最終轉(zhuǎn)染時siRNA的使用終濃度了,。以96孔板篩選,,25nM終濃度,每個基因3個復(fù)孔為例,,大概可以支持個10次篩選左右


客戶:這樣啊,,那0.1nmol確實(shí)夠用了,篩到以后,,我再單獨(dú)購買大規(guī)格的siRNA就是了,,沒必要篩選的時候就買那么多,不劃算
DAO:對的,,就是這個意思


客戶:行,,那我了解了,我現(xiàn)在就去找找基因去,,你把泛素化集合相關(guān)的基因列表發(fā)我,,我看看選一些,再把我手頭上有的基因列一列,到時發(fā)你
DAO:好噠,,這是基因列表,,請查收
 
客戶:謝謝

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