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對于抗體結(jié)構(gòu)的質(zhì)量定量,，完整的結(jié)構(gòu)解析包括整體結(jié)構(gòu)分析、亞基水平分析和肽圖,。其中亞基水平分析在抗體藥物結(jié)構(gòu)分析中對設(shè)備要求低,，分析時間短，且做為QC認(rèn)證的試驗(yàn)方法,，有助于在研發(fā)前期理解抗體結(jié)構(gòu),。

Genovis抗體酶切產(chǎn)品可以在亞基水平幫助我們分析抗體片段的結(jié)構(gòu)，獲得均勻的Fab和Fc片段,。而目前應(yīng)用較為廣泛的胰蛋白酶（Trypsin）,、木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶（pepsin）切割位點(diǎn)并不專一，特異性差,，酶切結(jié)果隨時間的變化容易造成抗體未被切開或過度消化的結(jié)果,。因此,，Genovis可以幫助您更簡單高效的完成抗體結(jié)構(gòu)分析,。

1.    FabRICATOR

FabRICATOR (IdeS)廣泛用于表征、質(zhì)量控制,、穩(wěn)定性測試,、生產(chǎn)監(jiān)測和基于抗體的治療方法(如單克隆抗體,、ADC,、生物類似藥和Fc -融合蛋白)的克隆選擇,。該酶可在鉸鏈下方的單個氨基酸位點(diǎn)消化抗體,，生成同質(zhì)F(ab')2和Fc片段,。FabRICATOR可以用于消化人IgG1-4,，猴、鼠,、兔,、羊的IgG,。 

圖1  FabRICATOR酶切原理圖

 
圖2  FabRICATOR酶切確定抗體質(zhì)量屬性結(jié)果

除凍干酶外,，該酶還可以提供多種產(chǎn)品形式可滿足不同的試驗(yàn)需求,，幫助您更好的完成試驗(yàn),。

① FragIT™ 

FragIT旋轉(zhuǎn)柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的FabRICATOR (IdeS)酶，用于生成F(ab')2和Fc/2片段,，而不會對最終的制備產(chǎn)生酶污染,。

② FragIT™ Kit

適用于需要快速方便地消化抗體的應(yīng)用，或制備無殘留酶的Fc融合蛋白,，F(xiàn)ragIT小柱裝填有固定在瓊脂糖珠上的FabRICATOR,。使用FragIT試劑盒，均勻的F（ab'）2和Fc片段也可以使用CaptureSelect™親和純化柱進(jìn)行分離,。 

圖3  FragIT™ Kit工作原理圖

③ FabRICATOR®-HPLC

FabRICATOR-HPLC是一種快速柱上消化單克隆抗體的高效液相色譜柱,，它將FabRICATOR酶固定在與HPLC兼容的樹脂上，用于穩(wěn)定的,，可重復(fù)性的柱上抗體消化,。FabRICATOR-HPLC色譜柱可以用于標(biāo)準(zhǔn)的LC-MS常規(guī)分析；也可以是更*配置,，例如2D-LC配置,；*是將生物反應(yīng)器與MS連接為一個系統(tǒng)，該系統(tǒng)可以自動化在線進(jìn)行柱上消化,，抗體亞基分析,，這將大大減少操作人員時間、樣品處理誤差,，并增加樣品通量,。

圖4 FabRICATOR®-HPLC工作原理圖

④ FabRICATOR® MagIC

FabRICATOR® MagIC 可以用于抗體的自動化平臺，如Thermo Scientific™KingFisher™Duo Prime凈化系統(tǒng),，或者振動臺,。適用于手動或自動的基于IgG的生物制劑的常規(guī)分析。FabRICATOR MagIC 包含固定在磁性瓊脂糖珠上的FabRICATOR酶,，支持并行樣品制備和多種抗體亞基的分析,。

圖5  FabRICATOR® MagIC工作原理圖

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2.FabALACTICA®   

FabALACTICA (IgdE)促進(jìn)了雙特異性和多特異性抗體的表征和完整的Fc糖基化分析。它還簡化了單價結(jié)合,、高階結(jié)構(gòu),、二硫鍵和鉸鏈區(qū)突變抗體的研究。該酶在鉸鏈上方的特定位點(diǎn)消化人IgG1,，產(chǎn)生完整和均勻的Fab和Fc片段,。
 
圖6  FabALACTICA®酶切原理圖

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3.FabDELLO™   

FabDELLO對鉸鏈區(qū)突變的抗體(如LALA突變)具有活性，并使中級LC-MS分析能夠?qū)︺q鏈區(qū)突變抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行表征,。能夠特異性地在鉸鏈上方的單個位點(diǎn)消化人IgG1,，在不需要還原條件的情況下,，在兩小時內(nèi)生成完整的Fab和Fc片段,。

 
圖7 FabDELLO™酶切原理圖

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4.FabRICATOR®Z  鉸鏈下方  

FabRICATOR®Z (IdeZ)是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈下方的特定位點(diǎn)消化小鼠IgG2a和IgG3，在兩小時的孵化后產(chǎn)生生成F(ab')2和Fc片段,。
 
圖8 FabRICATOR®Z酶切原理圖
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5.FabULOUS ™

FabULOUS (SpeB)可用于制備的Fab片段可用于親和性研究,、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。
它可以在鉸鏈上方的特定位點(diǎn)消化人IgG和小鼠,、大鼠,、山羊、綿羊和兔子的IgG,，產(chǎn)生均勻的Fab片段,。

 
圖9 FabULOUS ™酶切原理圖

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5.GingisKHAN®   

GingisKHAN (Kgp)用于用LC-MS表征基于抗體的生物治療，研究Fc聚糖分析,，雙特異性抗體,，affinity和avidity效應(yīng)，并識別翻譯后修飾,。在鉸鏈上方的特定位點(diǎn)消化人IgG1,，產(chǎn)生完整和均勻的Fab和Fc片段。

 
圖10 GingisKHAN®酶切原理圖

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6.GlySERIAS™   

GlySERIAS是一種特別的酶,，可消化富含甘氨酸的融合蛋白連接物,，如Gly4Ser和Glyx Sery(GS)以及多甘氨酸(G)連接物。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結(jié)構(gòu)域,，以促進(jìn)特征分析,。融合蛋白的亞基水平分析既能降低整個樣品的復(fù)雜性，又能使結(jié)構(gòu)域具體化,。并允許特定領(lǐng)域的識別和翻譯后修飾的監(jiān)測,。

 
圖11 GlySERIAS™酶切原理圖

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