1.色譜柱信息

  InertSustain NH2液相色譜柱是在我公司研發(fā)的ES新型硅膠基質(zhì)上鍵合氨丙基的色譜柱,，正相分離模式適合用于維生素等脂溶性化合物的分離,，如果用于HILIC分離模式,，可以用于強(qiáng)極性至中等極性例如一些極性藥物、小生物分子的分離,。InertSustain NH2液相色譜柱從硅膠基質(zhì)的合成,，到化學(xué)處理和裝填后的性能檢測，都是在本公司嚴(yán)格的產(chǎn)品控制下進(jìn)行,，因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現(xiàn)性,；通過獨(dú)有的裝填技術(shù)填裝的NH2柱柱床密度均一穩(wěn)定，從而確保色譜柱具有高柱效,，目前NH2柱用于HILIC(親水性作用,，用于反相系統(tǒng))模式分離的情況愈來愈多，在極性和親水性化合物如糖類,、有機(jī)酸,、有機(jī)堿、氨基酸,、多肽水解物等的分離過程中,，可作為改變柱選擇性和提高分辨率的分離工具。

  為了能長期保持InertSustain NH2液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱,，在使用色譜柱之前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書,。

2.使用前的檢查與須知事項(xiàng)

●檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝,，檢查色譜柱的填料名稱,、尺寸規(guī)格、連接形式是否相符,。

●色譜柱中封存流動(dòng)相為正己烷/乙醇=98：2,，v/v。

3.色譜柱填料規(guī)格

4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運(yùn)輸過程中,，兩端用堵頭密封,。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時(shí)，首先請(qǐng)確保系統(tǒng)中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的,。如果不能互溶,，請(qǐng)采用一種能夠與系統(tǒng)及色譜柱都能互溶的溶劑(e.g.異丙醇)對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統(tǒng)中，并注意流動(dòng)相的方向要與柱上標(biāo)記的方向保持一致,。我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)接頭型式為

1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖),，同時(shí)還有耐高壓液相系統(tǒng)的UP型(如下右圖)(目前NH2柱暫不提供UPLC柱)。如果需要其他接頭形式請(qǐng)另行咨詢,。

  色譜柱連接好之后,，請(qǐng)確認(rèn)無漏液現(xiàn)象之后再進(jìn)行后續(xù)操作。

  新的NH2柱是保存在正己烷/乙醇(98：2，v/v)的溶液中,，在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中,，硅膠填料可能會(huì)干涸，如果用于正相分離模式,，正相柱的平衡時(shí)間一般較長,，直接用正己烷/乙醇(98：2，v/v)沖洗50倍柱體積活化,，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速,，然后用流動(dòng)相平衡之后再進(jìn)樣分析；如果用在反相系統(tǒng)中分離,，推薦用至少50倍柱體積異丙醇過渡(注意接色譜柱之前,，用二通代替色譜柱連接系統(tǒng)，用異丙醇將系統(tǒng)包含進(jìn)樣器部分徹底清洗,，除水完全之后,，再連接色譜柱)，再用純的乙腈沖洗20倍柱體積對(duì)色譜柱進(jìn)行平衡,，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速,，然后用不含緩沖鹽的流動(dòng)相進(jìn)行平衡20倍柱體積，再用流動(dòng)相平衡,，待壓力和基線穩(wěn)定之后,，再進(jìn)樣分析。(如果在活化過程中即發(fā)現(xiàn)壓力和基線不正常時(shí),，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我公司工程師處理。)

5.樣品與流動(dòng)相

  為避免色譜柱堵塞,，所有樣品及溶劑,，包括緩沖溶液在內(nèi)，在使用前必須用0.45μm或者0.22 μm的濾膜過濾,。在正相色譜中,，固定相的水分含量常常是影響選擇性的關(guān)鍵因素，大部分溶劑都內(nèi)含有小部分的溶解水分(正己烷20℃水分含量是0.0111% w/w),，如發(fā)現(xiàn)色譜柱保留性能發(fā)生變化,，可用流動(dòng)相低流速長時(shí)間充分平衡。

HILIC模式分離中,，樣品溶劑需要含60-100%的有機(jī)溶劑,，水的比例應(yīng)盡量小，推薦5%的水作為自動(dòng)進(jìn)樣器的清洗液,。適用于HILIC分離的緩沖鹽體系為甲酸鹽和乙酸鹽,，因?yàn)榧词乖俸芨弑壤挠袡C(jī)溶劑中它們也有很好的溶解性。避免使用磷酸鹽及其他低溶解性緩沖鹽，以防析出堵塞色譜柱,。對(duì)于大多數(shù)分析樣品,，推薦的緩沖鹽濃度為5-20mM。避免使用其他非揮發(fā)性緩沖鹽,、TFA或者離子對(duì)試劑,，它們會(huì)干擾HILIC分離機(jī)理，并抑制MS信號(hào),。通常的HILIC應(yīng)用中,，一般使用50-95%濃度乙腈的水溶性緩沖鹽，如甲酸鹽,、乙酸鹽或者它們的酸作為流動(dòng)相,。流動(dòng)相使用前請(qǐng)務(wù)必進(jìn)行脫氣。

6.色譜柱的保養(yǎng)

●pH NH2柱可在pH2~7.5范圍內(nèi)使用,，為保持色譜柱良好的壽命,，請(qǐng)避免較強(qiáng)的酸或堿性樣品或者流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱。

●耐壓 常規(guī)柱耐受壓力為20MPa,，HP系列耐壓為50MPa,，但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時(shí)間在高壓下運(yùn)行會(huì)對(duì)色譜柱造成難以修復(fù)的損害,，因此系統(tǒng)壓力升高之后,，建議盡快排查系統(tǒng)，如果是色譜柱壓力升高,，請(qǐng)及時(shí)采用適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱,。

●溫度 最高操作溫度為60℃，長時(shí)間在高溫下操作會(huì)顯著降低色譜柱壽命,。

●沖洗

正相模式清洗步驟：

1.每次清洗都用低流速起步,，當(dāng)檢測到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速；

2.先用10倍柱體積不含其它添加劑的流動(dòng)相中的弱溶劑,，如正己烷,、氯仿等沖洗色譜柱；3.用50柱體積的諸如乙酸乙酯,，二氯甲烷或異丙醇等流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,。

HILIC模式清洗步驟：

1.如果是采用緩沖鹽流動(dòng)相的情況下，做樣之前請(qǐng)務(wù)必用比緩沖鹽稍高比例的水充分過渡,，然后再用流動(dòng)相平衡,；2.每天做樣完畢之后，應(yīng)充分沖洗色譜柱,，首先用稍高比例的水相沖洗,，例如乙腈/水=60：40(v/v)沖洗20倍柱體積,，然后用乙腈/水=95：5(v/v)沖洗20倍柱體積，然后保存在這個(gè)流動(dòng)相下,。

●儲(chǔ)存 色譜柱長期不用,，建議沖洗方法完成之后，正相分離模式保存在與出廠封存溶劑相同的流動(dòng)相中,；HILIC 分離模式保存在存純乙腈中,，之后卸掉色譜柱，兩端用堵頭密封,，并放在溫度變化小的場所,。