1. 如果分離不含還原糖（如下文所示）的糖類或含糖化合物,，請遵循前文的一般建議。

2. 如果分離還原糖,，請查看以下信息,。

3. 還原糖可以發(fā)生變旋，導(dǎo)致α環(huán)與β環(huán)形式的糖（差向異構(gòu)體）產(chǎn)生,，這是一種不良分離,。

4. 升高溫度和pH值可使差向異構(gòu)體合并成一個(gè)峰：

5. 在35 ℃下使用高pH（0.2%三乙胺(TEA)或0.1%氨水(NH4OH)）和/或

6. 在高溫下(> 80 ℃)使用0.05% TEA (>80 ℃)。

7. 分離還原糖（例如果糖,、葡萄糖,、麥芽糖,、乳糖、阿拉伯糖,、甘油醛等）時(shí),，請注意遵循以下建議。否則會(huì)導(dǎo)致這些分析物出現(xiàn)分裂峰（差向異構(gòu)體分離）：

a. 以低流速運(yùn)行（例如,，在2.1 x 50 mm色譜柱上流速設(shè)置為0.10~0.13 mL/min）,，促進(jìn)差向異構(gòu)體峰合并。

b. 色譜柱較長時(shí),，可采用較高的流速（例如0.3 mL/min）,。和所有LC分離一樣，理想流速應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)來確定,。

c. 向兩個(gè)流動(dòng)相（例如A2,、B2等）儲(chǔ)液瓶中加入三乙胺(TEA)或氨水(NH4OH)改性劑。

d. 對于單糖和/或二糖的UPLC/ELSD分離,，典型的等度UPLC條件包括：

i. 含有0.2% TEA的75%乙腈(ACN),，35 °C，0.13 mL/min,，2.1 x 50 mm BEH Amide色譜柱,；

ii. 含有0.05% TEA的77%丙酮，85 °C,，0.15 mL/min,，2.1 x 50 mm BEH Amide色譜柱；

iii. 含有0.2% TEA的75% ACN,，35 °C,，0.2 mL/min，2.1 x 100 mm BEH Amide色譜柱,。

e. 對于更復(fù)雜的糖類混合物（例如多糖）的UPLC-ELSD分離,，典型的梯度UPLC條件包括（流動(dòng)相A和B中都需要添加TEA）：

i. 10 min內(nèi)梯度從80%變化至50% ACN（含0.2% TEA），35 °C,，0.13 mL/min,，2.1 x 100 mm BEH Amide色譜柱，或使用2.1 x 150 mm BEH Amide色譜柱（流速升至0.3 mL/min）,；

ii. 10 min內(nèi)丙酮從80%變化至55%（含0.05% TEA）,，85 °C，0.15 mL/min,，2.1 x 100 mm BEH Amide色譜柱,。

f. 對于單糖和二糖的UPLC-MS分離，典型的等度UPLC條件包括：

i. 75%ACN + 0.1% NH4OH,，35 ℃,，0.13 mL/min,，2.1 x 50 mm BEH Amide色譜柱。

g. 對于更復(fù)雜的糖類混合物（例如多糖）的UPLC-MS分離,，典型的梯度UPLC條件包括（流動(dòng)相A和B中都需要添加NH4OH）：

i. 10 min內(nèi)梯度從75%變化至45%ACN（含有0.1%NH4OH）,，35 °C，0.2 mL/min,，2.1 x 100 mm

BEH Amide色譜柱。

6. 更復(fù)雜的樣品混合物可能需要使用梯度條件和/或更長的UPLC色譜柱,。

7. 如果在一種或多種流動(dòng)相中使用了丙酮,，請勿使用丙酮作為樣品稀釋劑或針清洗溶劑。有關(guān)樣品稀釋劑建議和針清洗溶劑/灌注溶劑建議的其他技巧(＃3),，請參閱進(jìn)樣溶劑部分,。

8. 含糖/多糖/碳水化合物時(shí)，典型樣品前處理建議如下：

a. 液體樣品

i. 使用50:50 ACN/H2O稀釋,。

ii. 使用0.45μm或0.22μm針式過濾器過濾（如有必要）,。

b. 固體樣品

i. 稱取約3g樣品放入50 mL離心管中。

ii. 加入25 mL 50:50 ACN/H2O,，混合均勻（機(jī)械混勻）,。

iii. 在3200 rpm下離心30 min。

iv. 收集上清液,，使用0.45μm或0.22μm針式過濾器過濾（如有必要）,。

c. 視樣品和/或分析物濃度而定，可能需要對樣品進(jìn)行額外稀釋,。

d. 更復(fù)雜并且/或者分析物濃度更低的樣品可能需要額外的樣品前處理步驟（例如固相萃取(SPE)）,。

e. 考慮使用VanGuard BEH Amide保護(hù)柱保護(hù)UPLC色譜柱。

f. 建議通過在工作流程中加入HILIC質(zhì)量控制(QC)參比物質(zhì)來監(jiān)控系統(tǒng)的運(yùn)行狀況,。