Inertsil HILIC色譜柱操作說明

1.色譜柱信息

  Inertsil HILIC液相色譜柱是在高純度硅膠基質(zhì)上鍵合二羥基丙基的HILIC (Hydrophilic Interaction Chromatography)模式色譜柱，適合用于強極性至中等極性例如一些極性藥物,、小生物分子的分離,。Inertsil HILIC液相色譜柱從硅膠基質(zhì)的合成,，到化學(xué)處理和裝填后的性能檢測，都是在本公司嚴格的產(chǎn)品控制下進行,，因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現(xiàn)性;通過獨有的裝填技術(shù)填裝的HILIC柱柱床密度均一穩(wěn)定,，從而確保色譜柱具有高柱效，在極性和親水性化合物如碳水化合物,、代謝物,、有機酸、有機堿,、氨基酸,、蛋白及多肽水解物等的分離過程中，可作為改變柱選擇性和提高分辨率的分離工具,。

  為了能長期保持Inertsil8 HILIC液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱,，在使用色譜柱之前請仔細閱讀本說明書,。

2.使用前的檢查與須知事項

●檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝,，檢查色譜柱的填料名稱,、尺寸規(guī)格、連接形式是否相符,。

●色譜柱中封存流動相為乙腈/水=95:5, v/v,。

3.色譜柱填料規(guī)格

4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運輸過程中，兩端用堵頭密封,。當將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時,，首先請確保系統(tǒng)中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶,，請采用一種能夠與系統(tǒng)及色譜柱都能互溶的溶劑對系統(tǒng)進行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統(tǒng)中,，并注意流動相的方向要與柱.上標記的方向保持一致。我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標準接頭型式為1/ 16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖),， 同時還有耐高壓液相系統(tǒng)的UP型(如下右圖) ( 目前HILIC系列暫不提供UPLC柱),。如果需要其他接頭形式請另行咨詢。

色譜柱連接好之后,，請確認無漏液現(xiàn)象之后再進行后續(xù)操作,。

  新的HILIC柱是保存在乙腈/水(95:5, v/v)的溶液中，在儲存和運輸過程中,，硅膠填料可能會干涸,推薦用純的乙腈沖洗10~20倍柱體積對色譜柱進行活化,，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速。(如果在活化過程中即發(fā)現(xiàn)壓力和基線不正常時,，請及時聯(lián)系我公司工程師及時處理,。)然后再用不含緩沖鹽的流動相進行平衡20倍柱體積，再用流動相平衡,，待壓

力和基線穩(wěn)定之后,，再進樣分析。

5.樣品與流動相

  為避免色譜柱堵塞,，所有樣品及溶劑，包括緩沖溶液在內(nèi),，在使用前必須用0.45μm或者0.22uμm的濾膜過濾,。樣品溶劑需要含60-100%的有機溶劑，水的比例應(yīng)盡量小,，推薦5%的水作為自動進樣器的清洗液,。適用于HILIC分離的緩沖鹽體系為甲酸鹽和乙酸鹽，因為即使再很高比例的有機溶劑中它們也有很好的溶解性,。避免使用磷酸鹽及其他低溶解性緩沖鹽,，以防析出堵塞色譜柱,。對于大多數(shù)分析樣品，推薦的緩沖鹽濃度為5--20mM,。避免使用其他非揮發(fā)性緩沖鹽,、TFA或者離子對試劑，它們會干擾HILIC分離機理,，并抑制MS信號,。通常的HILIC應(yīng)用中，一般使用50-95%濃度乙腈的水溶性緩沖鹽,，如甲酸鹽,、乙酸鹽或者它

們的酸作為流動相。流動相使用前請務(wù)必進行脫氣,。

6.色譜柱的保養(yǎng)

●pH HILIC色譜柱可在pH2 ~7.5范圍內(nèi)使用,，為保持色譜柱良好的壽命，請避免較強的酸或堿性樣品或者流動相進入色譜柱,。

●耐壓HILIC常規(guī)色譜柱耐受壓力為20MPa, HP系列耐壓為50MPa,，但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時間在高壓下運行會對色譜柱造成難以修復(fù)的損害,，因此系統(tǒng)壓力升高之后,，建議盡快排查系統(tǒng)，如果是色譜柱壓力升高,，請及時采用適當溶劑沖洗色譜柱,。

●溫度 最高操作溫度為60℃，長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命,。

●沖洗

1.新柱平衡:新柱是保存在高比例的有機溶劑中,，建議先采用色譜柱保存流動相平衡色譜柱一段時間，觀察基線和壓力是否正常,，然后再通入流動相,。如果流動相中不使用緩沖鹽或離子對試劑，直接用流動相平衡即可;如果流動相使用緩沖鹽,，先要用高比例的水相充分過渡20倍柱體積,，然后進行流動相平衡。

2.使用完畢后的清洗,、保存及再使用時流動相的過渡:

①使用完畢后,，先用高比例的水相進行沖洗約20倍柱體積。

②如果流動相中不使用緩沖鹽或離子對試劑,，上述①完畢后,，用100%的有機溶劑沖洗約20倍柱體積，然后此條件下進行保存，再使用時直接沖流動相即可,。

③如果流動相中使用緩沖鹽或離子對試劑,，上述①完畢后，用100%的有機溶劑沖洗約20倍柱體積,，然后此條件下進行保存,，再使用時請務(wù)必用高比例的水相充分過渡20倍柱體積，再通入流動相,。

●儲存色譜柱 長期不用,， 建議日常沖洗方法完成之后，再用純乙腈沖洗20倍柱體積,，然后保存在純乙腈中,，之后卸掉色譜柱，兩端用堵頭密封,，并放在溫度變化小的場所,。