ACQUITY UPLC BEH Amide, 130?, 1.7μm糖基分析專用柱的清洗、再生和儲存

a. 清洗與再生

  如果發(fā)生峰形改變,、譜峰分叉,、出現(xiàn)肩峰、保留時間改變,、分離度變化,、殘留、鬼峰或反壓升高,，可能說明色譜柱受到污染,。選擇可能溶解可疑污染物的清洗選項。

1. 所有清洗步驟在高溫下更有效,?？梢栽?/span>70 °C下進行清洗。

2. 使用上述色譜柱常用流速的一半進行清洗可能會很有用,。在這種情況下出現(xiàn)高壓的可能性就降低了,。

3. 首先采用同時也是最簡單的清洗步驟是在0–100%水范圍內(nèi)運行一系列梯度。確保降低水相比例高于75%的梯度的流速,。在清洗過程中,，柱長為150 mm的色譜柱應(yīng)在250 μL/min或更低的流速下操作。梯度可短至5倍柱體積,，并且3–5次重復(fù)即可達到效果,。

4. 再生步驟和使用100%水性流動相進行沖洗的步驟有助于保持最佳峰形和獲得最高的HILIC分離選擇性。此外,，分析人員可使用含有0.1% TFA的流動相執(zhí)行梯度,，以保持或恢復(fù)BEH Amide糖蛋白分析專用柱的性能。一些離子態(tài)污染物可能會強烈吸附到HILIC固定相上,，TFA能夠中和這類污染物以及與其形成離子對,，從而有效清洗色譜柱固定相。

5. 用戶可進樣多種不同的清洗溶液以除去色譜柱中的強吸附物質(zhì)或顆粒物質(zhì),。通過系統(tǒng)配置實現(xiàn)最大體積進樣,。使用這類強清洗溶液時，最好斷開檢測器與色譜柱的連接并直接使其流向廢液盤。

6. 通常建議將流向變換或反沖作為清洗步驟的一部分,。此項應(yīng)保留為最后的解決辦法,。此方法有可能進一步損壞色譜柱或提供瞬時性能改善。

b. 儲存

  如果需要將色譜柱在室溫下放置超過四天,，應(yīng)將其保存于100%乙腈中,。色譜柱在高溫和/或極端pH下使用后，應(yīng)立即保存于100%乙腈中,，盡可能延長色譜柱使用壽命,。切勿將色譜柱保存在高水相(<50%有機相)流動相中，因為這樣會滋生細(xì)菌,。如果流動相中含有緩沖鹽,，則先用10倍柱體積(有關(guān)常規(guī)色譜柱體積，請參見表1)的HPLC級水沖洗色譜柱,，再用100%乙腈沖洗并儲存,。如果未執(zhí)行這一中間步驟，在引入100%乙腈時色譜柱或系統(tǒng)中可能會出現(xiàn)緩沖鹽沉淀,。將色譜柱完全密封,，防止溶劑蒸發(fā)而導(dǎo)致柱床變干。

  注：如果色譜柱運行了含甲酸鹽(如,，甲酸銨,、甲酸等)的流動相，并且之后使用100%乙腈進行沖洗,，那么在重新安裝色譜柱并再次運行含甲酸鹽的流動相時,，可能需要花費略長的柱平衡時間。