特性：

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄,。收到細(xì)胞后，在倒置鏡下*好是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況,。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作,，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液,，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。(二)如果細(xì)胞已長滿,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次,。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半,，分到新的培養(yǎng)瓶中,。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二,。

注意事項(xiàng)：

1,、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?/span>10X或20X物鏡下。

2,、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。

3,、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4,、收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請及時(shí)與我們。