MCF7/FU人乳腺癌氟尿嘧啶耐藥株性:
安全性:所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,,并請(qǐng)注意防護(hù),,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后,,在倒置鏡下(*好是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況,。
(一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),,嚴(yán)格無菌操作,,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,,換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng),。
(二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,,之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓,,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化,。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中,。如果沒有特別說明,,收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。
人 注意事項(xiàng):
1,、觀察細(xì)胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?/span>10X或20X物鏡下,。
2,、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。
3,、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,,可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi),。
4、收到細(xì)胞后,,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)及時(shí)與我們,。
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