3T3-GFP成纖維細(xì)胞-綠色標(biāo)記操作步驟：
請收到細(xì)胞后,，在倒置鏡下(建議在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況,。
（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作,，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液,，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng),。
（二） (二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下：
1.棄去培養(yǎng)液,，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中,。
如果沒有特別說明,，收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。