ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定,。但ELISA測定中影響因素較多,，而且其操作中有一定的技術要求,，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果,。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素,；②試劑因素；③操作因素,。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析,。1．樣品稀釋 酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋,，不可避免會產生很強的非特異性反應,，出現假陽性。因此,，國外檢測血清抗體的試劑盒,，均規(guī)定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應,，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來,。一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性,。但是,，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如某些產品應取10μl樣品進行稀釋,，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋,，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數不準確,，檢測結果出現問題,。2．試劑盒平衡 試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上,。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應不夠充分,。冬季室溫低,，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。?3．樣品和試劑的混勻 稀釋前,、后的樣品必須充分混勻,，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性,。