應用范圍:
該試劑盒在冰凍切片的免疫熒光染色中表現(xiàn)出的性能,。
產(chǎn)品優(yōu)點:
1、操作簡單,重復性好,;
2,、較傳統(tǒng)方法能獲得更高信噪比科研圖片;
3,、節(jié)省抗體用量,比傳統(tǒng)方法節(jié)約20%-40%抗體用量,;
4、節(jié)約科研時間,只需要30分鐘,,比傳統(tǒng)方法實驗速度提高約10倍,;
操作步驟:
1,、1、將組織浸泡入固定液中(TIF-1),,4℃固定24小時,。(對于那些需要進行灌注的動物:緩慢的用生理鹽水灌注直到流出的生理鹽水變澄清,然后快速的將組織取出進行固定操作)
2,、再將組織浸泡在組織孵育緩沖液中(TIF-2),,4℃孵育48小時。
3,、將組織冰凍切片成10-20um的厚度,,然后貼片到已經(jīng)用多聚賴氨酸包被的載玻片上,置切片到-20℃或-80℃保存待用,。
4,、在常溫下,用試劑盒組分封閉液(TIF-3)將一抗和二抗稀釋成一抗和二抗抗體工作液,。
5,、在常溫下,用試劑盒組分洗滌液A(TIF-4)孵育組織10min,然后用300ul洗滌液B(TIF-5)洗滌2次,。
6,、用150ul一抗抗體工作液,4°C孵育組織過夜,,然后用洗滌液B(TIF-5)洗滌組織3次,,每次用300ul。
7,、用150ul二抗抗體工作液,,常溫下孵育組織10min,然后用洗滌液B(TIF-5)洗滌組織3次,,每次用300ul,。(二抗操作,需要避光,,以減少熒光淬滅,。)
8、封片劑封片,,待干后顯微鏡成像,。