傳代細胞培養(yǎng)

實驗原理：
傳代細胞的培養(yǎng)使用已成功構建的細胞株,，大量培養(yǎng)狀態(tài)良好的同種細胞,，并維持細胞種的延續(xù),。傳代培養(yǎng)是細胞培養(yǎng)常規(guī)操作之一,，也是所有細胞生物學實驗的基礎,。傳代細胞根據(jù)細胞的生長習性可分為貼壁細胞和懸浮細胞。

實驗流程：

1.觀察培養(yǎng)基是否正常,，細胞狀態(tài)如何,，細胞密度如何，決定是否傳代,。觀察時擰緊蓋子,。
2.加熱PBS、versene,、培養(yǎng)基,，(提前做好) 瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞,。
3.打開超凈臺(先開風機,，后開照明)，用75%乙醇清潔臺面,，點燃酒精燈,。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多,，可以用其他容器先裝廢液,。取小離心管一個，置于架子上。
4.取尖吸管,、吸量管各一支,，放置在的架上。放置的方式,，注意吸管,、吸量管前端都不要與架子接觸。
5.取待傳代的細胞,。打開versene,，用酒精燈外焰燒。燒吸管時距離酒精燈心遠些,，不要把渣滓?guī)нM去,。把試劑拿入臺子的時候，盡量平穩(wěn),，不要讓試劑碰到瓶口,。
6.用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基，置離心管中,，吸量管加入versene,，然后將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去),。在離心管中間部分將液體加入,。吸液體和加液體時都不要對著細胞。
7.打開胰酶,，然后將versene棄掉,。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入,。加胰酶后,，盡快放平，使細胞消化時間一致,。
8.將細胞放入37度孵箱,。放孵箱2min, 收胰酶，打開PBS. 之后拿出來鏡下隨時觀察,。使用二次消化法,，去除容器中殘余的細胞。別忘了用舊培養(yǎng)基中和,。
9.取細胞,，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后(細胞變圓,，但不漂起),，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養(yǎng)基加入細胞，吹打,，至所有細胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來,。用PBS洗細胞，versene對細胞有毒性,，且不能被血清中和,。然后吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘,。
10.吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中,。
11.細胞離心畢，用吸新培養(yǎng)基的管棄去上清,，先把泡沫吸走,。換吸量管吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量，加入離心管,，小體積混勻,，將細胞重懸，尖吸管吹勻,。
12.擦計數(shù)板,，用槍吸10ul的液體，計數(shù),。不要把槍伸到離心管內(nèi),。
13.吸量管吸取細胞懸液，加入新的培養(yǎng)皿中,。鏡下觀察,，搖勻,，放入37度孵育,。收超凈臺。

科研和臨床應用：

傳代細胞細胞可用于所有細胞實驗,，常用于進行細胞增殖,、細胞凋亡、細胞侵襲和藥物實驗等多方面的研究,。