掃描電鏡在觀察生物樣品時(shí)，具有以下特點(diǎn)：多角度觀察樣品的表面結(jié)構(gòu),；不需要將樣品切成薄片,；景深大、圖像立體感強(qiáng),；放大倍數(shù)從幾十倍到幾十萬(wàn)倍連續(xù)可調(diào),；在觀察形貌的同時(shí)可以對(duì)微區(qū)的成分進(jìn)行定量和定性分析。而能否獲得真實(shí),、清晰,、理想的掃描電鏡觀察結(jié)果，樣品的制備過程是關(guān)鍵,。
生物樣品含水直接觀察,，會(huì)對(duì)掃描電鏡造成以下影響：
1. 樣品蒸發(fā)的水蒸氣遭遇高能電子束,，會(huì)被電離而放電，引起束流大幅度波動(dòng),，使圖像模糊,，或者根本不能成像;
2. 大多數(shù)含水樣品在高真空中容易發(fā)生形態(tài)損傷，表面皺縮,、變形;
3. 樣品揮發(fā)會(huì)造成鏡頭,、光闌等的污染;
4. 燈絲會(huì)被上升水蒸氣氧化而變質(zhì)。
生物樣品的含水量高,，二次電子產(chǎn)率低，導(dǎo)電性差,，對(duì)熱,，電子束敏感，僅有少數(shù)樣品如毛發(fā),、牙齒以及含水量極低的昆蟲等可以直接噴鍍觀察,，絕大多數(shù)的生物樣品均要求經(jīng)過干燥處理才能鍍金觀察。
干燥是掃描電鏡生物樣品制備中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),，如果處理不好,，會(huì)直接影響到觀察的清晰度與準(zhǔn)確度。要想制備出好的掃描電鏡生物樣品,，需要在干燥過程中盡可能減少由于水分蒸發(fā)而引起的樣品表面形貌的形變,，且必須確保干燥*。大多數(shù)動(dòng)植物容易發(fā)生明顯的塌陷和變形,。因此,，需要針對(duì)不同的生物樣品來選擇合適的干燥方法。
掃描電鏡生物樣品制備常用干燥方法
1. 自然干燥法
自然干燥法是指樣品中的水分在大氣中自然蒸發(fā),，或樣品經(jīng)脫水處理后脫水劑自然揮發(fā)而干燥的方法,。
對(duì)干種子、果殼,、某些干花粉,、昆蟲標(biāo)本等來說，自然干燥法是一個(gè)簡(jiǎn)易實(shí)用有效的方法,，雖然在自然干燥過程中,，樣品體積有所收縮，但卻保留了樣品的基本形態(tài),。適用于外表堅(jiān)硬的樣品,，如外表有殼的昆蟲，木材等,。
自然風(fēng)干——直接觀察螨蟲
2. 烘干干燥法
烘干干燥法是將要研究的樣品用烘干箱烘干,，一般溫度控制在 80℃ 以下,，烘干程度以含水量在 5% 以下為好。此方法的干燥速度較快,，但水分蒸發(fā)時(shí)可能造成樣品變形或斷裂,。適用于不易變形且耐熱的樣品，比如淀粉粒,、孢子粉等,。
烘干的花粉噴金后直接可以用二次電子觀察
3. 臨界點(diǎn)干燥法
臨界點(diǎn)干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)下，液體和氣體的密度相等,，氣液界面*消失,，液體的表面張力系數(shù)為零。臨界點(diǎn)干燥法之所以一直被視為制作生物醫(yī)學(xué)掃描樣品可靠的干燥方法,，是因?yàn)榇朔芟后w表面張力的作用,，干燥出的樣品能zui大程度地保存其自然形態(tài)。
4. 冷凍干燥法
冷凍干燥法是將含水樣品放入低溫環(huán)境中冷凍,，或使用溶劑將樣品中的水逐級(jí)替換后冷凍,，然后抽真空升華。它是利用低溫和真空,，使樣品中的水分或溶劑直接升華,，以達(dá)到干燥樣品的目的。冷凍干燥過程不經(jīng)過液相階段,，因而避免了氣相和液相之間表面張力對(duì)樣品的損傷,。
5. 真空干燥法
真空干燥法指的是將經(jīng)脫水（多用梯度脫水）的樣品置于真空容器中進(jìn)行干燥的方法。真空干燥法選用高熔點(diǎn)的有機(jī)溶劑（叔丁醇,、乙腈,、六甲基二硅胺烷、正丁醇等）作升華介質(zhì),，既保留了冷凍干燥法的優(yōu)點(diǎn),，又不用對(duì)樣品進(jìn)行冷凍處理，無冷凍損傷,，且操作簡(jiǎn)單,。適用于所有生物樣品，特別是細(xì)菌,、細(xì)胞等微小樣品,。
經(jīng)過梯度脫水真空干燥的桿菌可以輕松獲得高倍圖像
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