液相色譜法與氣相色譜法一樣,，都屬于色譜法，具有：選擇性高,、分離效率高,、靈敏度高、分析速度快等特點,。本文就兩種色譜法的應(yīng)用范圍,、儀器構(gòu)造等不同點做出比較。
氣相與液相的概念
氣相
氣相色譜是一種物理的分離方法,。利用被測物質(zhì)各組分在不同兩相間分配系數(shù)(溶解度)的微小差異,，當(dāng)兩相作相對運動時，這些物質(zhì)在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分配使原來只有微小的性質(zhì)差異產(chǎn)生很大的效果而使不同組分得到分離,。
液相
液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上引用了氣相色譜的理論,。在技術(shù)上，流動相改為高壓輸送;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,，從而,使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬);同時,，柱后連有高靈敏度的檢測器可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。
應(yīng)用范圍
氣相
分離能力好,、靈敏度高,、分析速度快、操作方便等,。
受技術(shù)條件的限制,，沸點太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析，一般對500℃以下不易揮發(fā)或受熱易分解的物質(zhì)部分可采用衍生化法或裂解法,。
液相
液相色譜法,，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化,，因此,，不受試樣揮發(fā)性的限制,。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差,、相對分子量大(大于400以上)的有機物(些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的75%～80%),。原則上，都可應(yīng)用液相色譜法來進(jìn)行分離,、分析,。據(jù)統(tǒng)計，在已知化合物中能用氣相色譜分析的約占20%,，而能用液相色譜分析的約占70～80%,。
氣相儀器構(gòu)造
氣相
由載氣源、進(jìn)樣部分,、色譜柱,、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成,。進(jìn)樣部分,、色譜柱和檢測器的溫度均在控制狀態(tài)。
1.柱箱：
色譜柱是氣相色譜儀的心臟,，樣品中的各個組份在色譜柱中經(jīng)過反復(fù)多次分配后得到分離,，從而達(dá)到分析的目的，柱箱的作用就是安裝色譜柱,。由于色譜柱的兩端分別連接進(jìn)樣器和檢測器,，因此，進(jìn)樣器和檢測器的下端(接頭)均插入柱箱,。柱箱能夠安裝各種填充柱和毛細(xì)管柱并且操作方便,。色譜柱(樣品)需要在一定的溫度條件下工作，因此,，采用微機對柱箱進(jìn)行溫度控制,，并且由于設(shè)計合理，柱箱內(nèi)的梯度很小,。
對于一些成份復(fù)雜,、沸程較寬的樣品，柱箱還可進(jìn)行三階程序升溫控制,。且程序設(shè)定后自動運行無需人工干預(yù),，降溫時還能自動后開門排熱。
2.進(jìn)樣器：
進(jìn)樣器的作用是將樣品送入色譜柱,。如果是液體樣品,，進(jìn)樣器還必須將其汽化。因此,，采用微機對進(jìn)樣器進(jìn)行溫度控制,。
根據(jù)不同種類的色譜柱及不同的進(jìn)樣方式,，共有五種進(jìn)樣器可供選擇：
填充柱進(jìn)樣器
毛細(xì)管不分流進(jìn)樣器附件
毛細(xì)管分流進(jìn)樣器附件
毛細(xì)管分流/不分流進(jìn)樣器
六通閥氣體進(jìn)樣器
3.檢測器：
檢測器的作用是將樣品的化學(xué)信號轉(zhuǎn)化為物理信號(電信號)。
檢測器也需要在一定的溫度條件下才能正常工作,，因此,，采用微機對檢測器進(jìn)行溫度控制。
根據(jù)各種樣品的化學(xué)物理特性,，共有五種檢測器可供選擇：
氫火焰離子化檢測器(FID);
熱導(dǎo)檢測器(TCD);
電子捕獲檢測器(ECD);
氮磷檢測器(NPD);
火焰光度檢測器(FPD);
4.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：
該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集,、貯存、顯示,、打印和處理等操作,，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展,。
液相儀器構(gòu)造
液相：
液相色譜儀主要有：進(jìn)樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng),、分離系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。
1.進(jìn)樣系統(tǒng)
一般采用：隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,，進(jìn)樣量是恒定的,。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
2.輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動相貯存器和梯度儀三部分,。高壓泵的一般壓強為l.47～4.4×107Pa流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動相通過層析柱時,，可降低樣品在柱中的擴散效應(yīng),，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率,、回收樣品,、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀,，可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,，包括改變洗脫液的極性、離子強度,、pH值或改用,。。,。
3.分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括：色譜柱,、連接管和恒溫器
色譜柱一般長度為10～50cm(需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管)內(nèi)徑為2～5mm,，由不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,，柱內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成),，固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性(如,，硅膠表面的硅酸基因基本已除去),、多孔性和比表面積大的特點，加之其表面經(jīng)過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如,，磷酸基,、季胺基、羥甲基,、苯基,、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。
因此,，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性,，例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來,。
另外，固定相基質(zhì)粒小,，柱床極易達(dá)到均勻,、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應(yīng),?；|(zhì)粒度小、微孔淺,，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短,。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的,。根據(jù)柱效理論分析,，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大,。
這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,，會提高分辨率的道理。再者,，液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60℃通過改善傳質(zhì)速度,，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率,。
4.檢測系統(tǒng)
液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器,、示差折光檢測器和熒光檢測器三種：
(1)紫外檢測器
該檢測器適用于對紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。
其特點：使用面廣(如,，蛋白質(zhì),、核酸,、氨基酸、核苷酸,、多肽,、激素等均可使用);靈敏度高(檢測下限為10-10g/mL);線性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
(2)示差折光檢測器
凡具有與流動相折光率不同的樣品組分,，均可使用示差折光檢測器檢測;糖類化合物的檢測使用此檢測系統(tǒng),。這一系統(tǒng)通用性強、操作簡單,，但是,，靈敏度低(檢測下限為10-7g/mL)，流動相的變化會引起折光率的變化;因此,，它既不適用于痕量分析,，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
(3)熒光檢測器
凡具有熒光的物質(zhì),，在一定條件下,，其發(fā)射光的熒光強度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,，這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如,，多環(huán)芳烴,、氨基酸,、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測定,，其靈敏度很高(檢測下限為10-12～10-14g/mL)痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用,。
5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存,、顯示,、打印和處理等操作，使樣品的分離,、制備或鑒定工作能正確開展,。
液相色譜與氣相色譜法優(yōu)點和不足分析
只有20%樣品可不經(jīng)化學(xué)處理而能滿意地用氣相色譜分離，80%的有機化合物要用液相色譜分析,。
氣相色譜中流動相是惰性的,，它對組分沒有作用力，僅起運載作用,、而液相色譜的流動相不僅起運載作用,，而且流動相對組分有一定親合力，可以通過改變流動相種類和組成提高分離的選擇性;另外,，可作流動相的化合物多,，選擇余地廣,。
與氣相色譜相比，液相色譜儀的另一個優(yōu)點是：樣品的回收比較容易,，只要開口容器放在柱子末端,，就可以很容易地將所分離的各組分收集?；厥帐嵌康?，可以用來提純和制備具有足夠純度的單一物質(zhì)。
液相色譜不足的是,，日前,，檢測器的靈敏度不及氣相色譜。必須特別注意“柱外效應(yīng)”對柱效率及色譜分離的影響,。
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