一,、大口徑毛細(xì)管柱的直接進(jìn)樣
內(nèi)徑≥0.53mm的毛細(xì)管柱稱為大口徑毛細(xì)管柱，由于其內(nèi)徑比一般毛細(xì)管粗,，柱的樣品容量為填充柱的1/10～1/20,，介于填充柱和常規(guī)毛細(xì)管柱之間，柱內(nèi)載氣流速可高達(dá)10～20mL/min,，因此只需將氣化室的內(nèi)襯管和柱接頭稍加改進(jìn),，就可采用填充柱的進(jìn)樣口直接進(jìn)樣,。
圖中a、b,、c,、d為4種裝有改進(jìn)內(nèi)襯管的大口徑毛細(xì)管柱氣化室的結(jié)構(gòu)示意圖。其中僅(a)具有隔墊吹掃功能,。圖 (a)為常用的襯管,，適合柱流速快的大多數(shù)分析，但當(dāng)進(jìn)樣量大時,，因內(nèi)襯管容積小,，樣品氣化后體積膨脹，瞬間氣化室壓力可能超過載氣柱前壓,，會發(fā)生倒灌,，而使樣品蒸氣反擴(kuò)散至載氣管路中。為了防止倒灌可使用圖 (b),，它為具有大容積的襯管,，其上部為錐形，可防止樣品倒灌,，下部的錐形可保證樣品快速進(jìn)入毛細(xì)管柱,。圖 (c)的襯管為對(a)的改進(jìn)。圖 (d)是為向毛細(xì)管柱內(nèi)直接進(jìn)樣而設(shè)計的,，色譜柱頭一直伸到內(nèi)襯管的上部,，樣品可直接進(jìn)入柱頭氣化。
大口徑毛細(xì)管柱直接進(jìn)樣用襯管
二,、分流進(jìn)樣
它是毛細(xì)管氣相色譜首xuan的進(jìn)樣方式,，注入樣品后大部分樣品被放空，僅有約1/100的樣品進(jìn)入毛細(xì)管柱,，分流比可在1/20～1/200的范圍調(diào)節(jié),。適用于大部分氣體或液體樣品的分析，尤其對未知樣品使用分流進(jìn)樣,，可保護(hù)毛細(xì)管柱不被沾污,，防止柱效降低。
分流進(jìn)樣方式,，由總流量閥控制載氣的總流量,，載氣進(jìn)入氣化室分成兩路，一路作為隔墊吹掃氣,，流量僅為1～3mL/min,。另一路進(jìn)入氣化室與氣化的樣品蒸氣混合后再分為兩部分，其中大部分經(jīng)分流口放空,，僅小部分進(jìn)入毛細(xì)管柱,。若載氣總流量為104mL/min,隔墊吹掃氣設(shè)置為3mL/min,，則101mL/min進(jìn)入氣化室,，當(dāng)分流流量為100mL/min時,，柱內(nèi)流量僅為1 mL/min，此時分流比為1/100,。應(yīng)看到此氣路設(shè)計將柱前壓調(diào)節(jié)閥安裝在分流氣路上,，在載氣總流量不變的情況下，提高柱前壓,，使柱流速增大,，可加快分析速度;若保持柱前壓不變，通過調(diào)節(jié)總流量閥可改變分流比,，即總流量愈大,，分流比也愈大。
分流進(jìn)樣口原理示意圖
1-總流量控制閥;2-進(jìn)樣口;3-隔墊吹掃氣調(diào)節(jié)閥;4-隔墊吹掃氣出口;5-分流器;6-分流(不分流)電磁閥;7-柱前壓調(diào)節(jié)閥;8-柱前壓力表;9-分流出口;10-色譜柱
分流進(jìn)樣時,，氣化室的內(nèi)襯管如圖所示,，其大部分都不是直通式，管內(nèi)有縮徑處或裝有燒結(jié)板,，在縮口處放置有玻璃珠或硅烷化玻璃毛,，以增大與樣品接觸的面積，保證樣品*氣化,。填充物應(yīng)位于襯管的中間溫度高處,，也是注射器針尖所達(dá)到處，可減少分流歧視,。
氣化室的內(nèi)襯管
分流歧視是指在一定分流比的條件下,，由于樣品中不同組分的沸點(diǎn)差異，而造成它們的實(shí)際分流比是不同的,，因而會造成進(jìn)入毛細(xì)管柱的樣品組成不同于原始樣品的組成,，從而影響定量分析的準(zhǔn)確度。消除分流歧視的方法是在柱容量允許的條件下,，依據(jù)樣品濃度盡量采用小的分流比,，并盡量使樣品快速氣化。
三,、不分流進(jìn)樣
當(dāng)分流進(jìn)樣不能滿足對分析靈敏度的要求,，或分析含有大量溶劑的樣品中痕量組分時，才使用不分流進(jìn)樣技術(shù),。
為消除溶劑效應(yīng)可采用瞬間不分流技術(shù),，即當(dāng)進(jìn)樣開始時關(guān)閉分流電磁閥，使系統(tǒng)處于不分流狀態(tài),，如圖所示,，此時進(jìn)入系統(tǒng)的載氣,，僅為進(jìn)入毛細(xì)管柱和隔墊清掃所需的載氣量(3～5mL/min)，然后向氣化室注入2～3uL樣品,，經(jīng)30～80s,，待大部分氣化樣品開始進(jìn)入毛細(xì)管柱，立即開啟分流電磁閥,，使系統(tǒng)處于分流狀態(tài),。此時存留在氣化室的大部分溶劑氣體(顯然也包括約5%的樣品組分)很快從分流口放空，從而明顯地消除了溶劑拖尾,，使分流狀態(tài)一直保持到分析結(jié)束,，就可將原來被掩蓋在溶劑拖尾峰中的組分分離出來。
不分流進(jìn)樣口原理示意圖
1-總流量控制閥;2-進(jìn)樣口;3-隔墊吹掃氣調(diào)節(jié)閥;4-隔墊吹掃氣出口;5-分流器;6-分流(不分流)電磁閥;7-柱前壓調(diào)節(jié)閥;8-柱前壓力表;9-分流出口;10-色譜柱
F,，G-用于不分流進(jìn)樣或程序升溫氣化進(jìn)樣的氣化室的內(nèi)襯管
由上述可知不分流進(jìn)樣不是不分流,，而是一種將瞬間不分流與大部分時間分流相組合的進(jìn)樣方式。為獲得準(zhǔn)確的分析結(jié)果,，如何確定瞬間不分流的時間間隔,，就成為操作的關(guān)鍵。依據(jù)大多數(shù)文獻(xiàn)報道,，此時間間隔多采用0.75min,，就能保證95%的樣品進(jìn)入色譜柱。此時間間隔也可自行測定,，方法為：先設(shè)置一個長的時間間隔,，如120s，以保證全部樣品組分都進(jìn)入色譜柱,，分析后從譜圖上找到緊挨拖尾溶劑峰后的一個被*分離的色譜峰作測定標(biāo)志,，測出該峰的峰面積值，它就代表100%的樣品進(jìn)入了色譜柱,。然后逐步縮短不分流時間間隔,，如100s、80s,、60s,、40s，分別進(jìn)樣分析,，再計算標(biāo)志色譜峰的峰面積與次分析時的峰面積比值,，直到此值達(dá)到≥0.95，即為瞬間不分流的*時間間隔,，如圖所示,。
分流/不分流電磁閥開啟時間的影響
(a)放空閥開啟太早，只有少量樣品進(jìn)入柱內(nèi);
(b)放空閥開啟太晚，后樣品被大大稀釋,，溶劑峰嚴(yán)重拖尾;
(c)放空閥開啟時間恰到好處
一般地講,，使用高沸點(diǎn)溶劑比低沸點(diǎn)溶劑有利，因?yàn)槿軇┓悬c(diǎn)高時,，容易實(shí)現(xiàn)溶劑聚焦,，且可使用較高的色譜柱初始溫度，還可降低注射器針尖歧視以及氣化室的壓力突變,。表1中列出了常見的溶劑及其沸點(diǎn)和實(shí)現(xiàn)溶劑聚焦宜采用的色譜柱初始溫度,。
表1 常貝溶劑的沸點(diǎn)和實(shí)現(xiàn)溶劑聚焦宜采用的色譜柱初始溫度
注：①只能用于固定液交聯(lián)的色譜柱。
對高沸點(diǎn)樣品,，不分流時間間隔長一些有利于提高分析靈敏度，而不影響測定準(zhǔn)確度;對低沸點(diǎn)樣品,，則盡可能采用短的不分流時間間隔,，以便既能大限度消除溶劑拖尾，又可保證分析的準(zhǔn)確度,。
使用不分流進(jìn)樣時,，樣品進(jìn)入毛細(xì)管柱的量比分流進(jìn)樣多，并利用了溶劑效應(yīng)(又稱溶劑聚焦),，使與溶劑揮發(fā)性相接近的微量組分被濃縮在尚未揮發(fā)的溶劑中,，從而獲得微量組分的狹窄譜帶并提高了分離度，還可提高檢測的靈敏度和定量測定結(jié)果的準(zhǔn)確度,。
應(yīng)當(dāng)指出,，溶劑效應(yīng)的正確應(yīng)用會受到氣化室溫度，毛細(xì)管柱柱箱溫度,，進(jìn)樣量和樣品中溶劑沸點(diǎn)的制約,，它是在氣化室溫度、柱箱溫度皆低于溶劑沸點(diǎn)20～25℃的條件下產(chǎn)生的,。當(dāng)氣化后溶劑樣品混合物大量進(jìn)入色譜柱頭時,，大量低沸點(diǎn)的溶劑會在柱入口內(nèi)壁短期凝聚一層越來越厚的溶劑液膜(df)，起臨時固定液的作用,，因而會造成毛細(xì)管柱的相比β值大幅下降,，但溶質(zhì)的分配系數(shù)Kp保持恒定，因此會隨溶劑液膜df的加厚,，使樣品中所有組分的容量因子k大大增加
式中,，r0為柱內(nèi)徑。
這樣使進(jìn)樣后的樣品組分的譜帶前沿,，總是在一個越來越厚的混合固定液液膜上移動,，而樣品譜帶的后部則是在一個相對較薄的液膜(主要是固定液的液膜)上移動，結(jié)果使樣品譜帶的前沿移動得慢，而譜帶后部移動得快,，從而使每個組分的譜帶被壓縮而變窄,，呈現(xiàn)出溶劑聚焦的效應(yīng)。
另一方面,，溶劑的極性一定要與樣品的極性相匹配,，且要保證溶劑在所有被測樣品組分之前出峰，否則早流出的峰就會被溶劑的大峰掩蓋,。同時,，溶劑還要與固定相匹配，才能實(shí)現(xiàn)有效的溶劑聚焦,。不分流進(jìn)樣也是分析高沸點(diǎn)痕量組分的首xuan方法,。
當(dāng)采用不分流進(jìn)樣方式時，氣化室溫度設(shè)置可比分流進(jìn)樣時稍低一些,，以使樣品在氣化室滯留時間長一些,，氣化速度稍慢一些。但此溫度下限應(yīng)能保證待測組分在瞬間不分流時間間隔內(nèi)能*氣化,。進(jìn)樣后應(yīng)盡量采用程序升溫方式操作,，以保證溶劑聚焦的良好結(jié)果。進(jìn)樣量不宜超過2～3uL,，應(yīng)采用容積大的內(nèi)襯管,，否則會產(chǎn)生樣品倒灌;進(jìn)樣速度應(yīng)快些，進(jìn)樣速度的重現(xiàn)性會影響分析結(jié)果的重復(fù)性,。
四,、冷柱頭進(jìn)樣
對受熱不穩(wěn)定的樣品，可將其直接注入處于室溫或更低溫度下的毛細(xì)管柱柱頭,。此時氣化室的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)如圖所示：無加熱裝置,，但有冷空氣或制冷劑(液態(tài)N2或CO2)的入口和出口;注射針入口處無進(jìn)樣隔墊，但有一停止閥可阻止或允許注射針將樣品注入冷柱頭,。進(jìn)樣時,，先把注射針頭插入進(jìn)樣通道，停在停止閥上部,，再開啟停止閥,，將針頭插到毛細(xì)管柱頭上，快速注射(約0.5uL)樣品,，然后將注射針頭提回到停止閥上部,，關(guān)上閥門，拔出注射針,，立即開始程序升溫分析,。
此進(jìn)樣系統(tǒng)的密封是依據(jù)注射針頭(外徑0.23mm、長80mm)和進(jìn)樣通道(內(nèi)徑0.3mm)的緊密配合來實(shí)現(xiàn)的。
冷柱頭進(jìn)樣口
冷柱頭進(jìn)樣時,，柱溫比所用溶劑的沸點(diǎn)低25～30℃,，氣化后的溶劑在柱頭處冷凝，此層溶劑形成臨時性液膜固定相,，在載氣流的作用下伸展產(chǎn)生溢流區(qū)(圖8-59中A),，當(dāng)溶質(zhì)分布于整個溢流區(qū)，會引起進(jìn)樣譜帶的展寬(圖8-59中B),，為抑制此種現(xiàn)象產(chǎn)生,，可使用保留間隙技術(shù)。保留間隙是一段經(jīng)過去活處理但沒有固定相的毛細(xì)管,，因此它對任何溶質(zhì)或溶劑都無保留作用,，即k'=0。保留間隙的去活試劑應(yīng)與溶劑的性質(zhì)相近,，例如樣品的溶劑是非極性時,，則應(yīng)采用非極性去活試劑(如D4;八甲基環(huán)四硅氧烷)，以使溶劑與保留間隙表面有很好的潤濕性,。通常當(dāng)進(jìn)樣1～2uL時，保留間隙長度為0.5～1.0m,，溶劑的溢流區(qū)就處于保留間隙柱區(qū),，當(dāng)溶劑蒸發(fā)時，隨載氣向前移動,，較易揮發(fā)的組分(k<5)被溶劑聚焦,，較難蒸發(fā)的組分保留在色譜柱頭的固定相上(如圖中C, D)聚焦，從而達(dá)到克服溶劑溢流造成的譜帶加寬,。
保留間隙的作用可總結(jié)為：
?、偻ㄟ^溶劑聚焦和固定液聚焦使進(jìn)樣譜帶變窄;
②解決溢流區(qū)太長產(chǎn)生峰劈裂問題;
?、劭梢宰鳛楸Ｗo(hù)柱使非揮發(fā)性臟組分不進(jìn)入分析柱;
?、芸勺鳛榧?xì)口徑毛細(xì)管柱與自動柱上進(jìn)樣器匹配的界面;
⑤用作 LC-GC聯(lián)用的界面,。
保留間隙使用很多次后,，鈍化層會剝落下來露出表面的吸附點(diǎn)，所以工作中要注意更換新的保留間隙,，實(shí)際經(jīng)驗(yàn)是保留間隙約可進(jìn)樣100次,。
冷柱頭進(jìn)樣方式的保留間隙作用機(jī)理
o為易揮發(fā)組分;·為高沸點(diǎn)組分
冷柱頭進(jìn)樣的優(yōu)點(diǎn)是消除了寬沸程樣品組成的失真和受熱不穩(wěn)定樣品的吸附與分解;分離的柱效高，靈敏度,、準(zhǔn)確度和精密度都比較高,。缺點(diǎn)是僅適于分析濃度簇0.1%的樣品，對高濃度樣品需稀釋后再進(jìn)樣，否則引起柱超載;的細(xì)長注射針頭操作不當(dāng)易損壞;長期使用柱頭易被沽污;各組分的保留值重復(fù)性較差,。
冷柱頭進(jìn)樣遠(yuǎn)不及分流進(jìn)樣,、不分流進(jìn)樣使用得那么普遍，冷柱頭進(jìn)樣器不是氣相色譜儀的標(biāo)準(zhǔn)配置,，是需另購的選件,，會增加分析成本。
五,、程序升溫氣化進(jìn)樣(PTV)
將氣體或液體樣品注入氣化室處于低溫的內(nèi)襯管后,，立即按設(shè)定的程序升溫步驟，迅速提高氣化室的溫度,，再實(shí)現(xiàn)樣品的快速氣化,。此種氣化室的結(jié)構(gòu)如圖所示。它的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是：
?、贇饣壹扔袑?shí)現(xiàn)快速升溫的程序升溫電熱裝置,，又有可使之快速降溫的半導(dǎo)體制冷裝置或可通入制冷劑(液態(tài)N2或CO2)的進(jìn)、出口通道;
?、谂溆蟹至鏖y,，可實(shí)現(xiàn)分流進(jìn)樣和不分流進(jìn)樣;
③進(jìn)樣口可采用無隔墊進(jìn)樣頭,，配有的停止閥,，也可配備有隔墊的進(jìn)樣頭。
采用無隔墊進(jìn)樣頭的PTV進(jìn)樣口
由上述結(jié)構(gòu)可看出,，它在實(shí)現(xiàn)程序升溫氣化進(jìn)樣的同時,，也兼有分流/不分流進(jìn)樣和冷柱頭進(jìn)樣的功能，是用于毛細(xì)管柱氣相色譜分析的通用進(jìn)樣器,。由于其構(gòu)造復(fù)雜,，其價格約為分流/不分流進(jìn)樣器的3倍，為冷柱頭進(jìn)樣器的1.5倍,，因其功能齊全,，氣相色譜儀已配備了此種通用進(jìn)樣器。
此進(jìn)樣器具有既可將樣品低溫捕集又可將樣品快速氣化的功能,，*消除了寬沸程樣品的進(jìn)樣失真和分流歧視;可在氣化室實(shí)現(xiàn)對樣品的濃縮;使不揮發(fā)物滯留在內(nèi)襯管中,，保護(hù)了毛細(xì)管柱。它具有的進(jìn)樣操作方式如下：
?、俪绦蛏郎貧饣至鬟M(jìn)樣,，適合于絕大部分樣品分析，當(dāng)進(jìn)行方法研究或篩選樣品時,，應(yīng)先使用此種進(jìn)樣方式,。
?、诔绦蛏郎貧饣环至鬟M(jìn)樣，適合于痕量組分分析,，其操作要求和一般不分流進(jìn)樣相似,，僅瞬間不分流時間間隔要長一些，0.5～1.5min,且進(jìn)樣量可大于一般不分流進(jìn)樣,。
?、劾渲^進(jìn)樣，不啟動程序升溫,，適合于受熱易分解樣品的分析,。
④溶劑消除不分流進(jìn)樣,，可選擇性地除去樣品中的大量溶劑,，達(dá)到濃縮痕量組分的目的。
進(jìn)樣時,，先關(guān)閉分流閥,，控制氣化室溫度稍低于溶劑的沸點(diǎn)，緩慢注入樣品,，進(jìn)樣后立即打開分流閥,，可采用大的放空流量(可高達(dá)每分鐘幾百毫升)，同時以低的程序升溫速率升高氣化室的溫度,，加速溶劑的氣化一,，待大部分溶劑蒸氣放空后，立即關(guān)閉分流閥,，待氣化室達(dá)到設(shè)定高于柱溫的溫度，可啟動色譜柱程序升溫程序進(jìn)行樣品分析,。此方法的缺點(diǎn)是有部分低沸點(diǎn)組分會隨溶劑一起放空,，而使分析獲得的樣品組成失真。
由以上介紹的用于毛細(xì)管柱的直接進(jìn)樣,、分流進(jìn)樣,、不分流進(jìn)樣、冷柱頭進(jìn)樣和程序升溫氣化進(jìn)樣五種不同操作方式,，可看到影響毛細(xì)管柱分離效果的因素遠(yuǎn)比填充柱復(fù)雜,，但也提供了改善分離效果的更多調(diào)節(jié)因素。因此掌握毛細(xì)管柱的不同進(jìn)樣技術(shù),，也已成為色譜分析工作者必須掌握的基本功,。
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