色譜柱在液相系統(tǒng)中起著分離的作用,，是液相色譜系統(tǒng)的核心部件之一。柱管材質(zhì)有玻璃,、不銹鋼,、鋁銅、peek以及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他材質(zhì),。一般細粒度的填料采用勻漿填充法裝柱,，先將填料調(diào)成勻漿，在高壓泵作用下,，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi),，經(jīng)沖洗后備用。
一,、液相色譜柱結(jié)構
一般的液相色譜柱由柱管,、柱頭螺母、死堵,、篩板,、還有里面的填料組成。不同品牌的構造略有不同,。
二,、液相色譜柱的分類
液相色譜柱分類多樣主要有以下分類方式
按照固定相基質(zhì)分：無機氧化物(常用硅膠、氧化鋁),、聚合物基質(zhì)(常用DVB,、PS-DVB、PHAM等)和全石墨化碳色譜柱等,。
按結(jié)構和形狀分：全多孔硅膠柱和核殼柱,，無定型和球形，整體柱
按分離模式分：正相,、反相,、離子交換、體積排阻,、親和,、手性等
按照分離規(guī)模和色譜柱尺寸分：制備柱、分析柱,、微型柱,、毛細管柱等。
三,、柱性能評價
色譜柱的類型和構型(粒徑,、內(nèi)徑,、長度、碳載量,、孔徑等)選擇通常有分離的目的決定,，對特定類型的色譜柱，不同品牌不同系列之間差異很大,。表征色譜柱性能的參數(shù)主要有：理論塔板數(shù),、不對稱因子、對兩種不同溶質(zhì)的選擇性,、色譜柱的反壓、保留時間的重現(xiàn)性,、鍵和相濃度,、色譜柱的穩(wěn)定性等。一般色譜柱出廠COA報告包含其中比較關鍵的項目,。
四,、常用色譜柱
我們常見的色譜柱品牌有waters、安捷倫,、賽默飛,、島津、shodex,、大賽璐,、還有被大曹三耀收購的資生堂，國內(nèi)品牌比較出名的就是月旭,、依利特了,。
這么多的鍵和相到底應該怎么選，有沒有規(guī)律呢,，必須有啊,，往下瞅瞅。
又想起了化學老師那句的箴言：“結(jié)構決定性質(zhì),，性質(zhì)決定用途,。”結(jié)構和性質(zhì)還決定了這伙計需要用什么柱子分離。
了解被分離物有何區(qū)別?有無可電離集團?電離常數(shù)?PH如何影響色譜分析?比如下圖PH對分離的影響,。
常規(guī)的硅膠基質(zhì)色譜柱不能耐受高PH,，可以選擇雜化硅膠顆粒或者聚合物基質(zhì)的色譜柱,，多點鍵和的色譜柱在高PH下也會比單點鍵和的色譜柱壽命更長,。下圖便是某位小姐姐家的色譜柱在高PH下硅膠溶解的圖片。
五,、如何更好的使用色譜柱,，延長柱壽命?
1,、拿到色譜柱后先閱讀說明書，了解色譜柱的具體性能：耐受溫度,、耐受PH等,。以及色譜柱的沖洗和保存條件。經(jīng)過柱校測試確認色譜柱本身沒有問題后方可正常使用,。
2,、樣品充分前處理，確保樣品的潔凈;使用保護柱或在線過濾器,，根據(jù)實際情況更換保護柱芯或濾片,。
3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,。
4,、應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中如果流動相中使用了緩沖鹽,，避免出現(xiàn)鹽析,。
5、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),，以避免固定相被破壞,，PH過低共價鍵斷裂，鍵和相水解;PH過高硅膠溶解,。
6,、色譜柱使用過程中，如果壓力升高,，或出現(xiàn)污染,，選擇適當?shù)臈l件沖洗或反沖。
適用于C18,、C8,、C4、C1,、苯基,、PFP、AQ等
使用至少20倍柱體積的含有≥30%誰的極性郵寄溶劑(如乙腈)作為流動相除去柱子中的緩沖鹽;使用至少20倍柱體積的含有95%極性郵寄溶劑(如乙腈)沖洗色譜柱,。
污染物的去除常規(guī)星期后柱校沒有明顯恢復時,，使用50%異丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱體積以除去污染物。(以上操作可根據(jù)實驗室自身SOP視情況而定,，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的反相色譜柱沖洗的參考意見)
適用于氨基柱,、氰基柱
常規(guī)清洗：乙腈：水=60;40條件對色譜柱進行沖洗，清洗時不建議水相比例超過40%，過高使用水相容易導致鍵和相水解,。
色譜柱再生：當色譜柱經(jīng)過長期使用,，柱校降低時，可以對色譜柱進行再生,，乙腈：水(水中加入0.05%氨水)=60:40條件沖洗30倍柱體積,。(以上操作可根據(jù)實驗室自身SOP視情況而定，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)
適用于離子交換柱SCX,、SAX沖洗方法
日常沖洗：用100%水沖洗30個柱體積除鹽,，然后用20%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在20%甲醇或乙腈中。
長期保存：用100%水沖洗30個柱體積去除鹽,，然后用50%乙腈;50%水沖洗20個柱體積后保存在50%乙腈：50%水中,。
再生：先用高濃度的緩沖鹽(不超過1M)，然后再用100%水洗,，100%乙腈或甲醇沖洗,，再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根據(jù)實驗室自身SOP視情況而定,，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)
13
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務