微生物實驗容易被污染,，所以，對實驗環(huán)境,、設(shè)備和人員都需要很高的要求,，在實驗過程中需要注意的事項也很多。
無菌操作要求
1. 接種細菌時必須穿工作服,、戴工作帽,。
2. 進行接種食品樣品時，必須穿的工作服,、帽及拖鞋,，應(yīng)放在無菌室緩沖間， 工作前經(jīng)紫外線消毒后使用,。
3. 接種食品樣品時,，應(yīng)在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?/span>
4. 進行接種所用的吸管,，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌,，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用,，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼三次后使用,。
5. 從包裝中取出吸管時,，吸管尖部不能觸及外露部位,，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不得觸及試管或平皿邊,。
6. 接種樣品,、轉(zhuǎn)種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時,，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒,。
7. 接種環(huán)和針在接種細菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲,，必要時還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min,，再經(jīng)火焰燒灼,。
8. 吸管吸取菌液或樣品時，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取,，不得直接用口吸,。
不同型號的接種針和接種環(huán)
無菌間使用要求
1、無菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃,，并要密封,，不得隨意打開，并設(shè)有與無菌 間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門,，另設(shè)有0.5-0.7平方米的小窗,，以備進入無菌間后傳遞物品。
2,、無菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔,，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺面,，不得存放與實驗無關(guān)的物品,。
3、無菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊,， 打開紫外燈,，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈,，距離在1.0m處,，照射時間不少于30min，使用紫外燈,，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作,，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭,，除去上面灰塵和油垢,，以減少紫外線穿透的影響。
4,、處理和接種食品標(biāo)本時,，進入無菌間操作，不得隨意出入,，如需要傳遞物品,，可通過小窗傳遞。
5,、在無菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時,，則應(yīng)有過濾裝置,。
消毒滅菌要求
微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基,、被污染和接種的培養(yǎng)物等,，必須經(jīng)滅菌后方能使用。滅菌方式有干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法和間歇滅菌方法
1,、滅菌前準備
(1)所有需要滅菌的物品首先應(yīng)清洗晾干,，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密,，如用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開,。
(2)裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好,，試管蓋好蓋,，注射器須將管芯抽出，用紗布包好,。
2,、裝放
(1)干熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁,。
(2)大型高壓蒸氣鍋：：放置滅菌物品分別包扎好,，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能 過擠,。
3,、設(shè)備檢查
(1)檢查門的開關(guān)是否靈活，橡皮圈有無損壞,，是否平整,。
(2)檢查壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關(guān)好門和蓋,，通蒸氣或加熱后,，觀察是式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進行：
①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水,，立式高壓鍋加水16L(重復(fù)使用時應(yīng)將水 量補足,，水變混濁需更換).
②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用),。
?、凵w好頂蓋擰緊，勿使漏氣;置滅菌器于火源上加熱,，立式壓力鍋通上電源,，并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣(水沸騰后排氣10-15min),。
?、荜P(guān)閉排氣閥,，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時間(按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定),。
?、葸_到規(guī)定時間后，對需干燥的物品,，立即打開排氣閥排出蒸氣,，待壓力恢復(fù)到零時，自然冷卻至 60℃后開蓋取物,，如為液體物品,，不要打開排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源,，待自然冷卻,，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再開蓋取物,，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破,。
(3)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行：
①關(guān)緊鍋門,，打開進氣閥,，將蒸氣引入夾層進行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動排出,。
?、?夾層達到預(yù)定溫度后，打開鍋室進氣閥,，將蒸氣引入鍋室,，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動排出。
?、鄞伿疫_到規(guī)定的壓力與溫度時,，調(diào)節(jié)進氣閥，使保持恒定,。
?、茏匀换蛉斯そ禍刂?0℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法,，以防突然降壓,，液體劇烈沸騰或容器爆破。
?、菔褂米詣映绦蚩刂剖綁毫φ魵鉁缇?，在放好物品關(guān)緊門后，應(yīng)根據(jù)物品類別按 動相應(yīng)開關(guān)，以便按要求程序自動進行滅菌,，滅菌時必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時間以備查,，操作要求應(yīng)嚴格按照廠家說明書進行。
4,、滅菌溫度與時間
壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間見下表：
(1)干熱滅菌器滅菌溫度160℃,，1.5-2h。
(2)壓力蒸氣滅菌 鍋滅菌溫度與時間,。
間接滅菌方法
1,、滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞,，可用此法滅菌,。
(1)將欲滅菌物品置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋,，打開排水口,，使器內(nèi)余水排盡。
(2)關(guān)閉排水口,，打開進氣門,，根據(jù)需要消毒10～20min。
(3)滅菌完畢關(guān)閉進氣門,，取出物品待冷至室溫溫度,，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒,，如此三次,，即可達到滅菌目的。
2,、血清凝固器使用方法,，培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成份時，因高熱會破壞其營 養(yǎng)成份,，故用低溫,，可使血清凝固，又可達到滅菌目的,。
(1)在使用該法滅菌的血清等分裝時,，需嚴格遵守?zé)o菌操作，試管,、平皿也經(jīng)滅菌后使用,。
(2)將培養(yǎng)基按要求使成斜面或高層，加足水后,，接上電源,，升溫75～90℃1h滅菌,，放37℃溫箱過夜，再如此滅菌三次,。
3,、煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15 min,，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5 min，加入0.02%甲醛,，80℃煮60 min均可達到滅菌目的,， 但選用 煮沸消毒的增消劑時， 應(yīng)注意對物品的腐蝕性,。
4,、滅菌處理：滅菌后物品，按正常情況已屬無菌,，從滅菌器中取出應(yīng)仔細檢查放置,，以免再度污染。
(1)物品取出,，隨即檢查包裝的完整性,，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無菌物品使用,。
(2)取出的物品,，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無菌物品使用,。
(3)培養(yǎng)基或試劑等,，應(yīng)檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態(tài)，未達到者應(yīng)廢棄,。
(4)啟閉式容器,，在取出時應(yīng)將篩孔關(guān)閉。
(5)取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,，或沾有水液,，均視為受到污染，不可作為無 菌物品使用,。
(6)取出的合格滅菌物品,，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴禁與未滅菌物品混放,。
(7)凡屬合格物品,，應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限。
(8)每批滅菌處理完成后,，記錄滅菌品名,、數(shù)量,、溫度、時間,、操作者,。
有毒有菌污物處理要求
微生物實驗所用實驗器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理,，一律不得帶出實驗室,。
1、經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴密的容器或鐵絲筐內(nèi),，并集中存放在地點,，待統(tǒng)一進行高壓滅菌。
2,、經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物,，必須經(jīng)121℃30min高壓滅菌。
3,、染菌后的吸管,，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸液中，少浸泡24h(消毒液體不得低于浸泡的高度)再經(jīng)121℃30 min高壓滅菌,。
4,、涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道,，烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯 中,，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后,，煮沸洗滌,。做凝集試驗用的玻片或平皿，必須高壓滅菌后洗滌,。
5,、打碎的培養(yǎng)物，立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位,，浸泡半小時后再擦拭干凈,。
污染的工作服或進行烈性試驗所穿的工作服、帽,、口罩等,，應(yīng)放入消毒袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌,。
培養(yǎng)基制備要求
培養(yǎng)基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長,。因為各種微生物對其營養(yǎng)要求不*相同，培養(yǎng)目的的不同,，各種培養(yǎng)基制備要求如下：
1,、根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱取,，然后溶于蒸餾水中，在使用前對應(yīng)用的試劑藥 品應(yīng)進行質(zhì)量檢驗,。
2,、PH 測定及調(diào)節(jié)：PH測定要在培養(yǎng)基冷至室溫時進行，因在熱或冷的情況下,，其PH有一定差異,，當(dāng)測定好時，按計算量加入堿或酸混勻后,，應(yīng)再測試一次,。培養(yǎng)基 PH值一定要準確，否則會影響微生物的生長或影響結(jié)果的觀察,。但需注意因高壓滅菌可 影響一些培養(yǎng)基的 PH 降低或升高,，故不宜滅菌壓力過高或次數(shù)太多,，以免影響培養(yǎng)基 的質(zhì)量,，指示劑、去氧膽酸鈉,、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H后再加入,。
3、培養(yǎng)基需保持澄清,，便于觀察細菌的生長情況,，培養(yǎng)基加熱煮沸后，可用脫脂棉 花或絨布過濾,，以除去沉淀物,，必要時可用雞蛋白澄清處理，所用瓊脂條要預(yù)先洗凈晾干后使用,，避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度,。
4、盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵,、銅等容器,，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。
5,、培養(yǎng)基的滅菌既要達到*滅菌目的,，又要注意不因加熱而降低其營養(yǎng)價值，一般121℃15min即可,，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類,、血清、明膠等,，則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌,，一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀,、卵黃、TTC,、抗菌素等,，待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。
6,、每批培養(yǎng)基制備好后,，應(yīng)做無菌生長試驗及所檢菌株生長試驗。如果是生化培養(yǎng) 基,，使用標(biāo)準菌株接種培養(yǎng),，觀察生化反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)呈正常反應(yīng),，培養(yǎng)基不應(yīng)貯存過久,，必要時可置4℃冰箱存放。
7,、目前各種干燥培養(yǎng)基較多,，每批需用標(biāo)準菌株進行生長試驗或生化反應(yīng)觀察，各種培養(yǎng)基用相應(yīng)菌株生長試驗良好后方可應(yīng)用,，新購進的或存放過久的干燥培養(yǎng)基,，在配制時也應(yīng)測PH，使用時需根據(jù)產(chǎn)品說明書用量和方法進行,。
8,、每批制備的培養(yǎng)基所用化學(xué)試劑、滅菌情況及菌株生長試驗結(jié)果,、制作人員等應(yīng)做好記錄,，以備查詢。
樣品采集及處理要求
1,、所采集的檢驗樣品一定要具有代表性,，采樣時應(yīng)首先對該批食品原料、加工,、運輸,、貯藏方法條件、周圍環(huán)境衛(wèi)生狀況等進行詳細調(diào)查,，檢查是否有污染源存在,。
2、根據(jù)食品的種類及數(shù)量,，采樣數(shù)量及方法應(yīng)按標(biāo)準檢驗方法的要求進行,。
3、采樣應(yīng)注意無菌操作,，容器必須滅菌,，避免環(huán)境中微生物污染,，容器不得使用煤酚皂溶液，用新潔爾滅,、酒精等消du藥物滅菌,，更不能含有此類消du藥物或抗生素類藥物，以避免殺死樣品中的微生物,，所用剪,、刀、匙用具也需滅菌方可應(yīng)用,。
4,、樣品采集后應(yīng)立即送往檢驗室進行檢驗，送檢過程中一般不超過3h,，如路程較遠,，可保存在1～5℃環(huán)境中，如需冷凍者,，則在凍存狀態(tài)下送檢,。
5、檢驗室收到樣品后,，進行登記(樣品名稱,、送檢單位,、數(shù)量,、日期、編號等),，觀察樣品的外觀,，如果發(fā)現(xiàn)有下列情況之一者，可拒絕檢驗,。
(1)樣品經(jīng)過特殊高壓,、煮沸或其他方法殺菌者，失去代表原食品檢驗意義者,。
(2)瓶,、袋裝食品已啟開者，熟肉及其制品,、熟禽等食品已折碎不完整者,，即失去原食品形狀者(食物中毒樣品除外)。
(3)按規(guī)定采樣數(shù)量不足者,。
對送檢符合要求的樣品,， 檢驗室收到后，應(yīng)立即進行檢驗,，如果條件不具備,，應(yīng)置4℃冰箱存放,，及時準備創(chuàng)造條件，然后進行檢驗,。
6,、樣品檢驗時，根據(jù)其不同性狀,，進行適當(dāng)處理,。
(1)液體樣品接種時，應(yīng)充分混合均勻,，按量吸取進行接種,。
(2)固體樣品，用滅菌刀,、剪取其不同部位共25g,，置于225ml 滅菌生理鹽水或其他溶液中，用均質(zhì)器攪碎混勻后,，按量吸取接種,。
(3)瓶、袋裝食品應(yīng)用滅菌操作啟開,，根據(jù)性狀選擇上述方法處理后接種,。
記錄和報告的要求
1、檢驗室收到樣品后,，首先進行外觀檢驗,，及時按照國家標(biāo)準檢驗方法進行檢驗， 檢驗過程中要認真,、負責(zé),、嚴格進行無菌操作，避免環(huán)境中微生物污染,。
2,、樣品檢驗過程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫出試驗紀錄,，以作為對結(jié)果分析,、判定的依據(jù)，記錄要求詳細,、清楚,、真實、客觀,、不得涂改和偽造,。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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