HPLC以它定量分析結果準確,、分析周期短、分析范圍廣及分析檢測限低等優(yōu)勢,，在食品添加劑,、藥物成分分析等多領域得到了廣泛的應用。本文就液相色譜儀在實際操作時應注意的事項及維護做了簡單介紹,。
主要部件介紹
輸液系統(tǒng)
輸液系統(tǒng)主要包括在線脫氣裝置,、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置,。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進入柱子前排除氣泡,。液相色譜柱的填料顆粒小，通過 2~5 mm 的色譜柱受到的流動阻力很大,，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱,。
高壓泵按輸液性能可分為恒壓,、恒流泵。按機械結構可分為：液壓隔膜泵,、氣動放大泵,、螺旋注射泵和往復柱塞泵。
進樣器
進樣器是將分析樣品送入色譜柱的裝置,，分為手動,、自動進樣器兩種。手動進樣器一般配有20~100μL的定量環(huán),。
色譜柱
色譜柱以液體為流動相，以廣義的固相為固定相來進行分析樣品的分離工作,。
色譜柱按照分離模式大致可以分為正相色譜柱和反相色譜柱,。
檢測器
檢測器是將色譜柱分離出樣品的物理或化學特性轉(zhuǎn)換為可以測量的電信號，通過色譜圖記錄下來,，由色譜圖中的峰形狀判斷分離效果,，依據(jù)標物、分析樣色譜圖的出峰時間,、峰面積分別對樣品進行定性定量分析,。
維護及使用注意事項
1.開關機操作注意
分析準備工作做好后，依次打開穩(wěn)壓電源,、高壓輸液泵,、柱溫箱、檢測器,，待各部件自檢結束,，打開連接儀器的電腦，啟動工作軟件,。分析工作結束后,，關閉工作軟件，再依次關閉檢測器,、柱溫箱和高壓輸液泵,。
2.對流動相的要求
為保證液相色譜儀器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的,，且經(jīng)過過濾雜質(zhì),、排除氣泡后裝入干凈的流動相貯存瓶中待用。
(1)流動相的物理化學性能要求
對分析物要有足夠的溶解能力,，以利于提高檢驗的靈敏度;流動相的黏度要小,，以保證合適的柱降壓;流動相的沸點要低，以利于制備分離時樣品的回收;流動相的 PH 值一般應在 2~7.5;使用期限不得超過 2 天,，否則產(chǎn)生細菌污染管路,。
(2)流動相的過濾
流動相在使用前都必須經(jīng)過濾,，以除去雜質(zhì)微粒。同時要定期清洗吸濾頭,，以防雜質(zhì)通過其進入流動相,。應依據(jù)其是否是水溶性選擇水膜或有機膜(0.45 μm 或 0.22 μm)，使用溶劑過濾裝置,，通過真空泵抽氣過濾,。
(3)流動相的脫氣
流動相必須預先脫氣，否則易產(chǎn)生氣泡,，影響泵的工作,。此外，溶解在流動相中的氧能與某些有機溶劑形成有紫外吸收的絡合物,，提高背景吸收,，會在梯度洗脫時造成基線漂移或形成鬼峰。常有的脫氣方法有在線真空脫氣法,、超聲波脫氣法,、抽真空脫氣法三種。
3.色譜柱的維護及使用注意事項
所有分析樣品把pH值調(diào)節(jié)到適合色譜柱的pH值范圍內(nèi),。進樣要避免超負荷,，這是保持色譜柱性能持久良好的重要方法之一。手動進樣器進樣的話,，進樣時動作要快速準確,。分析物成分復雜時，要在色譜柱前加色譜保護柱以保護色譜柱,。每次分析工作開始時,，要對色譜柱進行平衡，用含10%流動相中的有機溶劑的水溶液進行排氣和沖洗色譜柱和管路,，沖洗30分鐘左右,，將色譜柱中的純有機溶劑替換掉，然后再用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱,，直至基線平衡后方可進樣,。
每次分析工作結束后，一定要立即用一定量的水溶液*沖洗色譜柱中的緩沖鹽液,，再用對被測物洗脫能力強的溶劑來沖洗色譜柱,，沖洗時間不能小于1小時，洗脫溶劑的用量至少為柱體積的20倍,。若不及時沖洗色譜柱,，雜質(zhì)長時間積累在其中，易堵塞色譜柱,，降低柱效性能,。長期這樣,，會加速減少色譜柱使用壽命。色譜柱4天以上不使用,，應從儀器上取下,，用封頭螺帽把兩頭緊緊密封。色譜柱保存時注意不要強烈震動,、碰撞,。
4.高壓輸液泵的維護及使用注意事項
每次分析工作結束后，都應及時清洗泵,。當有緩沖鹽做流動相時,，緩沖鹽與有機溶劑互相交換前一定要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止鹽在有機相中結晶損壞泵中各組件,。緩沖鹽溶液的濃度不要過高,，要控制在5%以下，否則高濃度的緩沖鹽會磨損密封墊和活塞,，降低其使用壽命。長時間使用高濃度的緩沖鹽,，必須用10%的異丙醇色譜級溶液清洗泵,，從而保護柱塞和密封墊。
輸液泵工作前要設置工作壓力范圍,，正常工作壓力一般不要超過 30 Mpa,，否則經(jīng)常高壓會使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液,。平時分析工作要養(yǎng)成記錄壓力的好習慣,，這樣如果工作壓力超過平時正常壓力的10%~15%，就應及時查找原因,。
5.紫外檢測器的維護及使用注意事項
紫外檢測器有一定的使用壽命,，所以平時應盡量減少氘燈的使用時間，在柱平衡進行一大半之后,，在走基線之前,，打開檢測器光源;分析結束后即可關閉檢測器光源。要保持檢測器四周環(huán)境清潔,，實驗室盡量少開窗戶,，定期地面進行吸塵工作，防止檢測器工作時由于靜電吸附灰塵顆粒覆蓋在光學元件上,。檢測器池內(nèi)存在氣泡就會產(chǎn)生噪音,，噪音會干擾定量分析，所以流動相須充分脫氣后再使用,。
應定期清洗流通池,。如觀察到流通池內(nèi)部無氣泡或臟物,，應清洗流通池。通過注射器用異丙醇等有機溶劑沖洗池內(nèi),，以清洗透鏡,。如是含有緩沖鹽的溶劑作流動相，應在使用異丙醇沖洗前用水替換池中原先有的溶劑,。
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