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　　內(nèi)標(biāo)法是色譜定量分析中是一種重要技術(shù),。使用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),，它可被色譜拄所分離,，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積與相對(duì)響應(yīng)值,，即可求出待測(cè)組分在樣品中的百分含量,。

　　內(nèi)標(biāo)物的選擇

　　采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí),，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作,。理想地說，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個(gè)能得到純樣的己知化合物,，這樣它能以準(zhǔn)確,、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu),、極性,、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征,，應(yīng)該是被分析物質(zhì)的一個(gè)同系物,。

　　當(dāng)然，在色譜分析條件下,，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離,。需要指出的是，在少數(shù)情況下,，分析人員可能比較關(guān)心化臺(tái)物在一個(gè)復(fù)雜過程中所得到的回收率,，此時(shí)，他可以使用一種在這種過程中很容易被*回收的化臺(tái)物作內(nèi)標(biāo),，來測(cè)定感興趣化合物的百分回收率,，而不必遵循以上所說的選擇原則。

　　影響內(nèi)標(biāo)法的因素

　　在使用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí),，有哪些因素會(huì)影響內(nèi)標(biāo)和被測(cè)組分的峰高或峰面積的比值?

　　影響內(nèi)標(biāo)和被測(cè)組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的,、色譜方面的和儀器方面的三類。

　　化學(xué)方面：由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時(shí)出現(xiàn)?；瘜W(xué)方面的因素包括：內(nèi)標(biāo)物在樣品里混合不好;內(nèi)標(biāo)物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng);內(nèi)標(biāo)物純度可變等,。

　　色譜方面：對(duì)于一個(gè)比較成熟的方法來說，色譜方面的問題發(fā)生的可能性更大一些,，色譜上常見的一些問題(如滲漏)對(duì)面積的影響比較大,，對(duì)面積比的影響則要小一些，但如果面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度,，那么一定有某個(gè)重要的色譜問題存在,，比如進(jìn)樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標(biāo)濃度之間有很大的差別,，檢測(cè)器非線性等,。進(jìn)樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測(cè)器和積分裝置飽和,。

　　儀器方面：如果認(rèn)為方法比較可靠,，而色譜固看來也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置,、斜率和峰寬定位,。對(duì)積分裝置發(fā)生懷疑的有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對(duì)恒定,。

　　在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)注意什么?

　　在用內(nèi)標(biāo)法做色話定量分析時(shí),，先配制一定重量比的被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測(cè)量峰面積,，做重量比和面積比的關(guān)系曲線,，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在實(shí)際樣品分析時(shí)所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)所用的條件一致,，因此,，在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，不僅要注明色譜條件(如固定相,、柱溫,、載氣流速等，還應(yīng)注明進(jìn)樣體積和內(nèi)標(biāo)物濃度,。在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),，各點(diǎn)并不*落在直線上，此時(shí)應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標(biāo)準(zhǔn)偏差,，在使用過程中應(yīng)定期進(jìn)行單點(diǎn)校正,，若所得值與平均值的偏差小于2，曲線仍可使用,，若大于2,，則應(yīng)重作曲線,，如果曲線在鉸短時(shí)期內(nèi)即產(chǎn)生變動(dòng)，則不宜使用內(nèi)標(biāo)法定量,。