在對各類食品,、農(nóng)產(chǎn)品,、水產(chǎn)品中的農(nóng)殘、半揮發(fā)性有機物分析時,，在有機樣品萃取物中一般會含有大分子物質(zhì),，如果不去除這些物質(zhì),則導(dǎo)致色譜柱分離效率降低、進樣口和色譜柱的使用壽命縮短,進而影響數(shù)據(jù)分析結(jié),。因此,，在農(nóng)殘、半揮發(fā)性有機物的樣品分析前必須進行有效的凈化前處理,。而傳統(tǒng)的前處理過程耗時長,、溶劑消耗量大，所以,，GPC大規(guī)模應(yīng)用是一個必然趨勢,。
凝膠滲透色譜GPC(Gel Permeation Chromatography)也稱作體積排斥色譜[SEC(Size Exclusion Chromatography)]是用溶劑作流動相,，流經(jīng)多孔填料(如多孔硅膠或多孔樹脂) 作為分離介質(zhì)的液相色譜法,。
GPC是液相色譜的一個分支，其分離部件是一個以多孔性凝膠作為載體的色譜柱，凝膠的表面與內(nèi)部含有大量彼此貫穿的大小不等的空洞,。GPC儀的組成：泵系統(tǒng),、(自動)進樣系統(tǒng)、凝膠色譜柱,、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集與處理系統(tǒng),。
GPC的分離機理通常用“空間排斥效應(yīng)”解釋。
圖1分離原理簡圖
使用外力使含有樣品的流動相(氣體,、液體或超臨界流體)通過一固定于柱或平板上,、與流動相互不相溶的固定相表面。樣品中各組份在兩相中進行不同程度的作用,。與固定相作用強的組份隨流動相流出的速度慢,，反之，與固定相作用弱的組份隨流動相流出的速度快,。由于流出的速度的差異,，使得混合組份終形成各個單組份的“帶(band)”或“區(qū)(zone)”，對依次流出的各個單組份物質(zhì)可分別進行定性,、定量分析,。
操作指南
譜圖的表示方法：柱后流出物濃度隨保留值的變化
提供的信息：高聚物的平均分子量及其分布。根據(jù)所用凝膠的性質(zhì),，可以分為使用水溶液的凝膠過濾色譜法(GFC)和使用有機溶劑的凝膠滲透色譜法(GPC),。
只依據(jù)尺寸大小分離，大組分先被洗提出
色譜固定相是多孔性凝膠,，只有直徑小于孔徑的組分可以進入凝膠孔道,。大組分不能進入凝膠孔洞而被排阻，只能沿著凝膠粒子之間的空隙通過,，因而大的組分先被洗提出來,。
直徑小于孔徑的組分進入凝膠孔道
小組分可進入大部分凝膠孔洞，在色譜柱中滯留時間長,，會更慢被洗提出來,。溶劑分子因體積小，可進入所有凝膠孔洞,，因而是后從色譜柱中洗提出,。這也是與其他色譜法大的不同。
依據(jù)尺寸差異,，樣品組分分離
適用范圍
凝膠過濾色譜適于分析水溶液中的多肽,、蛋白質(zhì)、生物酶等生物分子;凝膠滲透色譜主要用于高聚物(如聚乙烯,、聚丙烯,、聚苯乙烯,、聚氯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯)的分子量測定,。
為什么要用GPC方法
1.相對分子量分布(多分散性指數(shù))對聚合物的性質(zhì)有重要影響,。
2.在相對分子質(zhì)量分布(多分散性指數(shù))成為人們關(guān)注的熱點后，經(jīng)典方法卻不能同時測定聚合物的相對分子質(zhì)量分布,。凝膠滲透色譜(GPC)的應(yīng)用改善了測試條件,，并提供了可以同時測定聚合物的相對分子質(zhì)量及其分布的方法，使其成為測定高分子相對分子質(zhì)量及其分布常用,、快速和有效的技術(shù),。
常見問題解答
1.溶劑的選擇?
能溶解多種聚合物;不能腐蝕儀器部件;與檢測器相匹配。
2.把激光光散射與凝膠色譜儀聯(lián)用?
在得到濃度譜圖的同時,，還可得到散射光強對淋出體積的譜圖,，從而計算出分子量分布曲線和整個試樣的各種平均分子量。
3.樣本的準(zhǔn)備?
激光光散射實驗中必須對樣品嚴(yán)格除塵,。溶液除塵是光散射成敗的關(guān)鍵,。首先是溶劑除塵，配置測試樣品的溶劑應(yīng)進行精餾,，并經(jīng)過0.2μm超濾膜過濾后方可使用,。配好的溶液也要用0.2μm的超濾膜過濾。另外,，測試中所用的器械,，如：注射器等，使用前要用洗液浸泡,，清水強力沖洗,。
4.GPC色譜柱選擇
(1)按照樣品所溶解的溶劑來選擇柱子所屬系列
THF、LV仿,、DMF
必須選擇合適的溶劑來溶解聚合物
(2)按照樣品分子量范圍來選擇柱子型號
樣品分子量應(yīng)該處在排阻極限和滲透極限范圍內(nèi),，并且應(yīng)該處在校正曲線線性范圍內(nèi)
5.GPC 儀器對載體的要求
(1)良好的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性;
(2)有一定的機械強度
(3)不易變形;
(4)流動阻力小
(5)對試樣沒有吸附作用
(6)分離范圍越大越好(取決于孔徑分布)等
(7)載體的粒度愈小，愈均勻,，堆積的愈緊密,，色譜柱分離效率愈高。
6.進樣體積
50-100uL之間(濃度在0.05%-0.5%之間)
7.GPC系統(tǒng)如何平衡
(1)安裝色譜柱之前,，用兩通管連接管路,，用流動相替換系統(tǒng)后換上GPC柱子。(注意溶劑互溶情況)
(2)RID平衡操作
分析開始前,，用流動相沖洗檢測器流路,。
流動相流速1ml/min，切換到R Flow,，使流動相通過檢測池的樣品池和參比池,，沖洗20min左右,。
然后切換R Flow 流路數(shù)次，將氣泡趕出檢測池,。
關(guān)閉R Flow，等待基線平穩(wěn),。
當(dāng)Balance 值高于50,，進行Balance 調(diào)整。
(3)色譜柱平衡
等溶劑峰出峰后在經(jīng)過約一次分析時間后基線才能走平,。
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