流動相相當于液相的血液,，在使用過程中會有各種需要注意的事項。其中有些“坑”千萬要注意,。
加入有機溶劑之后測量移動相酸堿度
校準pH計,，得到水溶液的正確pH回讀值——您要驗證的緩沖液是含水的。如果你用有機添加劑測量pH值,，得到的pH值會與添加有機溶劑之前的值不同,。
然而，zui重要的一點是要保持一致,。如果你總是在加入有機溶劑之后測量pH值,，那么務必保證在使用的方法中陳述你的步驟,，這樣的話其他人就會按照統(tǒng)一方式進行。這種方式并不保證準確,，但是至少可以保持方法的前后統(tǒng)一,。這也許會比得到的pH值更加重要。
沒有使用緩沖液
緩沖劑的作用就是用來控制Ph值并阻止其發(fā)生變化,。很多其他方法會改變流動相的Ph值,，會引起停留時間、峰形以及峰值響應的漂移,。
甲酸、TFA等不是緩沖劑,。
沒有在正常酸堿度范圍內使用緩沖液
每個緩沖鹽有2個pH單位范圍寬度,，在這個范圍內可以提供穩(wěn)定性*的pH值。窗口之外的緩沖鹽不具備有效的抗pH值變化能力,。要么在正確的范圍內使用緩沖劑,，要么選擇一種緩沖劑可以涵蓋你所需要的pH值。
向有機溶液中加緩沖液
將緩沖溶液與有機相混合,，會極有可能引起緩沖液沉淀,。在很多情況下，即使沉淀現象已經發(fā)生了,，但仍很難被發(fā)現,。記住，一定要將有機溶液加入到水相當中,，這可以很好的降低緩沖液沉淀的幾率,。
從0%用泵混合濃度梯度
現在使用的泵可以有效的混合流動相并實現在線脫氣，但并不是使用你的方法的任何人都會配有高質量的泵,。將A和B混合到一個單獨的溶液中,，在100%線上運行。
比如說通過用50ml水混合制備有機950ml起始混合物,。這樣做的好處就是可以減少HPLC之間的可變性,，減少系統(tǒng)中產生氣泡和沉淀的可能性。值得注意的是泵混合液的比例是95:5并不代表瓶體的預混合保留時間也為95:5,。
不要使用正確的改性酸或改性堿改變緩沖液
只能使用形成你使用的緩沖鹽的酸或堿,。比如磷酸鈉緩沖液應僅用磷酸或氫氧化鈉調節(jié)。
沒有在方法中闡述有關緩沖液的全部信息,，比如說在1000ml的水中加入5g磷酸鈉,。
緩沖劑的類型決定了能夠緩沖的Ph范圍。所需的濃度決定了緩沖強度,。5克或無水磷酸鈉和5克一水合物磷酸一鈉具有不同的緩沖強度,。
還沒先檢查就開始添加有機溶液
如果上一個方法中基線B中使用過的是緩沖液,，而你的方法中，基線B使用的是有機溶液,，好在你可以沉淀泵管和泵頭中的緩沖劑,。
支起瓶體清空zui后一滴
很有可能你沒有足夠的流動相完成整個操作，zui后樣品會冒煙的,。除了可能存在燒干泵系統(tǒng)和柱子的可能性之外,，流動相也會蒸發(fā)的一干二凈，瓶體頂部的流動相會發(fā)生變化,。
利用超聲脫氣的流動相
zui重要的一點就是確保所有的緩沖鹽已經溶解,，但是這是一種效果zui差的脫氣方式，并且它會很快讓流動相升溫,，從而引起有機成分蒸發(fā)掉,。為了省去之后不必要的麻煩，請用五分鐘時間使用真空過濾你的流動相,。
（源于實驗室與分析）
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