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超微量分光光度計(jì)有哪些使用限制?
超微量分光光度計(jì)是現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用儀器,,在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用廣泛,,但是我們必須了解一下分光光度計(jì)的一些使用限制,,這樣才不會(huì)出現(xiàn)失誤或者產(chǎn)生危險(xiǎn),。
在說(shuō)使用限制之前,我們先來(lái)了解一下超微量分光光度計(jì)的工作原理是物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律,。,,超微量分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,常用于核酸,,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量,。
論瑯伯-比爾定律的限制性條件:
其一:通過(guò)溶液的光必須是平行的;
其二:通過(guò)溶液的光必須是單色光,;
其三:待測(cè)溶液必須是純凈的,、均勻的且濃度不宜過(guò)高,這是瑯伯-比爾定律首要的三個(gè)前提條件,。
在實(shí)際的分光光度計(jì)的制造和使用過(guò)程中這三個(gè)條件是不可能達(dá)到的:
其一:因?yàn)楣馐侵本€傳播的,,在分光光度計(jì)制造過(guò)程中,燈源發(fā)出的光是發(fā)散的,,經(jīng)過(guò)聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過(guò)溶液的整體過(guò)程中,,光是不可能平行的。
其二:燈源發(fā)出的光是復(fù)合光,,經(jīng)過(guò)狹縫,,再經(jīng)過(guò)光柵分光等步驟,因?yàn)槭艿姜M縫和光柵本身的限制,,光柵分光不可能達(dá)到純單色光,。還有光度計(jì)的整體設(shè)計(jì)問(wèn)題,光度計(jì)不可能沒(méi)有其它的雜光存在,。
其三:用戶的溶液也不可能是純凈的,,也會(huì)含有一些雜質(zhì),這些對(duì)光度的吸收都會(huì)存在影響,。除以上三個(gè)方面的影響外,,在實(shí)際的光度計(jì)應(yīng)用過(guò)程中還會(huì)存在其他因素的影響,例如:
1,、經(jīng)過(guò)比色皿的光是否垂直,;
2,、比色皿寬度是否為10mm的標(biāo)準(zhǔn)值;
3,、測(cè)試波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確,;
4、程序設(shè)計(jì)是否存在漏洞等等,,都會(huì)直接影響到利用瑯伯-比爾定律計(jì)算出的結(jié)果,。
所以在日常的測(cè)試過(guò)程中,得出的結(jié)果和瑯伯-比爾定律有些偏差是很正常的,,只是我們關(guān)注偏差多少的問(wèn)題,。
關(guān)于超微量分光光度計(jì)的使用限制就給大家介紹到這里了,更多超微量分光光度計(jì)資訊請(qǐng)繼續(xù)關(guān)注邁上,。