一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,稱之為
普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行,。主要是用作簡(jiǎn)單的,,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。主要應(yīng)用于科研,、教學(xué),、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn),、檢疫等,。
PCR儀的種類總體來說可以分為兩大類:
PCR擴(kuò)增儀和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,,普通的PCR擴(kuò)增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度PCR儀,、和帶原位擴(kuò)增功能的原位PCR儀等等。
梯度PCR儀
一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀,。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同的DNApian段其的退火溫度不同,,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增,。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,,這樣既節(jié)約時(shí)間,也節(jié)約經(jīng)費(fèi),。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用,。正真的梯度,是每一排管都有的加熱控溫探頭,,2009年為止只有美國ABI公司可以做到,。其他的都是從兩頭的熱傳遞來設(shè)計(jì)控溫。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研,、教學(xué)機(jī)構(gòu),。
原位PCR儀
是用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀。如病原基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等,??杀3旨?xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,,在細(xì)胞的靶DNA所在的位置進(jìn)行基因擴(kuò)增,。不但可以檢測(cè)到靶DNA,還能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,。于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實(shí)用價(jià)值,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上增加熒光信號(hào)激發(fā)和采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器,。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同,,在PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增,。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),,得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。
熒光定量PCR儀有單通道,,雙通道和多通道之分,。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道,;有多種熒光標(biāo)記的時(shí)候使用多通道,。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量,,需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量,。多通道利于做多重PCR,實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)多種目的基因的功能,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè),、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè),、科研院校等,。