一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,,稱之為
普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增,。主要應(yīng)用于科研、教學,、臨床醫(yī)學,、檢驗、檢疫等,。
PCR儀的種類總體來說可以分為兩大類:
PCR擴增儀和實時熒光定量PCR儀,,普通的PCR擴增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度PCR儀、和帶原位擴增功能的原位PCR儀等等,。
梯度PCR儀
一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀,。因為被擴增的不同的DNApian段其的退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的退火溫度進行有效的擴增,。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,,也節(jié)約經(jīng)費,。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。正真的梯度,,是每一排管都有的加熱控溫探頭,,2009年為止只有美國ABI公司可以做到。其他的都是從兩頭的熱傳遞來設(shè)計控溫,。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研,、教學機構(gòu)。
原位PCR儀
是用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀,。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內(nèi)的作用位置等,。可保持細胞或組織的完整性,,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細胞中,,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,,還能標出靶序列在細胞內(nèi)的位置,。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實用價值。
實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設(shè)計基礎(chǔ)上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),,形成了具有熒光定量PCR功能的儀器,。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素,、熒光素等進行標記,,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增,。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),,得出量化的實時結(jié)果輸出,。
熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分,。當只用一種熒光探針標記的時候,,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道,。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物,,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量,。多通道利于做多重PCR,,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
實時熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學檢測,、生物醫(yī)藥研發(fā),、食品行業(yè)、科研院校等,。