一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為
普通PCR儀,。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行,。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。主要應(yīng)用于科研,、教學(xué),、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗,、檢疫等,。
PCR儀的種類總體來說可以分為兩大類:
PCR擴增儀和實時熒光定量PCR儀,普通的PCR擴增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度PCR儀,、和帶原位擴增功能的原位PCR儀等等,。
梯度PCR儀
一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNApian段其的退火溫度不同,,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約經(jīng)費,。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用,。正真的梯度,是每一排管都有的加熱控溫探頭,,2009年為止只有美國ABI公司可以做到,。其他的都是從兩頭的熱傳遞來設(shè)計控溫。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研,、教學(xué)機構(gòu),。
原位PCR儀
是用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內(nèi)的作用位置等,??杀3旨毎蚪M織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細胞中,,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增,。不但可以檢測到靶DNA,還能標(biāo)出靶序列在細胞內(nèi)的位置,。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實用價值,。
實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設(shè)計基礎(chǔ)上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器,。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標(biāo)記,,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增,。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出,。
熒光定量PCR儀有單通道,,雙通道和多通道之分,。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候,選用單通道,;有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道,。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量,。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能,。
實時熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測,、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè),、科研院校等,。