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PCR儀的發(fā)展歷程和原理分析
到如今,,PCR方法愈發(fā)趨向自動(dòng)化,,并從中衍生出更多的新技術(shù)方法,可以說,,PCR技術(shù)是支撐現(xiàn)代分子生物學(xué)發(fā)展的一塊重要基石,。這種技術(shù)的廣泛應(yīng)用催生了一個(gè)龐大的市場,多個(gè)公司均有各種類型的商品化PCR儀出售。
PCR原理:DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種的作用下可以變性解鏈成單鏈,,在DNA聚合酶的作用下,以單鏈為模版,,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成新的單鏈,,與模版配對成為雙鏈分子拷貝。在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),,DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,,并設(shè)計(jì)與模板DNA的5’端結(jié)合的兩條引物,加入DNA聚合酶,、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制,,多次重復(fù)“變性解鏈-退火-合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何級數(shù)大量擴(kuò)增特定的基因。而發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,,該類酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷,、同時(shí)也大大降低了成本,,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床,。
從PCR原理可以看出,,PCR儀的關(guān)鍵是升降溫的步驟。現(xiàn)在偶爾還能聽到一些前輩們笑談早年的PCR實(shí)驗(yàn)如何在3個(gè)水浴鍋中完成的趣聞,。經(jīng)過不斷改進(jìn),,今天的PCR已經(jīng)越來越完善和智能化。