技術(shù)文章
DNA抽提和純化方法
閱讀:3422 發(fā)布時間:2017-11-11DNA抽提和純化方法介紹:
一,、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,,消化蛋白,,然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二、甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三,、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,,DAN沉淀液繞于玻棒,。生成DNA約80kb。
四,、異丙醇沉淀法:基本同1法,,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
五,、表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,,乙醇沉淀或透析,。
六、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,,五分鐘,,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng),。
七,、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,,離心后取上清,,含少量DNA。