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桂寧（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司
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離心式脫鹽柱的使用步驟
2014-8-25 閱讀(13770)
G-Biosciences離心式脫鹽柱Spin-OUT GT-1200 Medi的使用步驟
G-Biosciences Spin-OUT GT-1200，與Pharmacia的Sephadex G-50的功能類似,，都是用來代替比較耗時(shí)的傳統(tǒng)透析處理,，以達(dá)到快速純化蛋白/替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的，不過前者是離心式的,，后者是重力式的,。GT-1200適宜于純化分子量大于12，000的蛋白質(zhì),，有兩種上樣量規(guī)格的：Micro和Medi,。沒有現(xiàn)成的使用說明材料，聽朋友介紹這是非常不錯(cuò)的品牌,，在國(guó)外很火,。感興趣之余啃下其英文說明書了，先了解下其使用步驟：
一,、使用前準(zhǔn)備：
1.上下顛倒數(shù)次，將管中的凝膠懸浮起來,，然后100×g離心1min,，讓膠體回到管底。這里有兩點(diǎn)需要注意的：1）新的柱子看過去幾乎是透明的,，不要認(rèn)為什么填料都沒有,，其實(shí)是顆粒太細(xì)了；2）離心力是×g,，在離心機(jī)上顯示的是RCF這個(gè)單位,，而不是RPM。這兩個(gè)單位有本質(zhì)區(qū)別,，需要特別留意,。其中：
RPM(revolution per minute)為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(單位:周/分鐘)；RCF(relative centrifugal force)為相對(duì)離心力,，以地心引力即重力加速度的倍數(shù)來表示,，一般用×g表示。 兩者轉(zhuǎn)換關(guān)系如下： RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r為離心機(jī)轉(zhuǎn)子半徑(單位:米),。
2.拔掉兩頭的塞子,，將柱子放在10ml離心管中，1,000×g離心2min以移除儲(chǔ)存buffer,。離心完成后,，即可看見白色的填充料。
二,、開始使用（交換buffer）
1. 用緩沖液平衡柱子：加入1-2ml緩沖液,，將柱子放到10ml離心管中，靜置數(shù)分鐘讓緩沖液全部進(jìn)入柱體后，再重復(fù)加入3-5次,。zui后以1,000×g離心2min,，棄掉收集到的溶液，以保證buffer被全部替換了,。
2. 將柱子放到新的離心管中,，緩慢加入蛋白質(zhì)樣品。注意,，上樣量為Medi的柱子zui多加入0.5ml樣品,，上樣量為Micro的柱子zui多加入0.1ml樣品。樣品加在柱子中間的凝膠上,，而不要碰到樹脂部件,。加樣結(jié)束后靜置1-2min，讓凝膠充分將樣品吸收,。
3. 將柱子放到一個(gè)新的離心管中,，1,000×g離心4min，即可獲得純化好樣品了,。
三,、柱子的再生
1. 柱子可以重復(fù)利用。
2. 需要用到2×蛋白質(zhì)洗脫buffer,，用量是每1ml填料使用1ml buffer,。
3. 加入洗脫buffer后靜置5min。
4. 再用5倍填料體積的去離子水沖洗柱子,。
5. zui后用30% 的乙醇保存在4℃條件下,。
