（1）相位倒轉(zhuǎn) 當(dāng)n’<n或n’>n時得到象的明暗反差正好相反,，稱為相位倒轉(zhuǎn)。當(dāng)相位差δ=0時是無法識別的,，隨著δ的增大反差變大,，當(dāng)δ繼續(xù)增大到某一值后會出現(xiàn)相位倒轉(zhuǎn)。用90%高吸光值（高反差）物鏡時,，這個轉(zhuǎn)變值約為0.55λ,，用70%標準吸光值的物鏡時約為0.33λ。較高吸光值的物鏡應(yīng)該用于分辨較小的光程差,。
（2）暈輪和漸暗效應(yīng) 在相差顯微鏡成象過程中,，某一結(jié)構(gòu)由于相位的延遲而變暗時，并不是光的損失,，而是光在象平面上重新分配的結(jié)果,。因此在黑暗區(qū)域明顯消失的光會在較暗物體的周圍出現(xiàn)一個明亮的暈輪。這是相差顯微鏡的缺點,，它妨礙了精細結(jié)構(gòu)的觀察,，當(dāng)環(huán)狀光闌很窄時暈輪現(xiàn)象更為嚴重。相差顯微鏡的另一個現(xiàn)象是漸暗效應(yīng),，指相差觀察相位延遲相同的較大區(qū)域時,，該區(qū)域邊緣會出現(xiàn)反差下降。
（3）樣品厚度的影響 當(dāng)進行相差觀察時,，樣品的厚度應(yīng)該為5μm或者更薄,，當(dāng)采用較厚的樣品時，樣品的上層是很清楚的,，深層則會模糊不清并且會產(chǎn)生相位移干擾及光的散射干擾,。
（4）蓋玻片和載玻片的影響樣品要蓋上蓋上蓋玻片，否則環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán)很難重合,。相差觀察對載玻片和蓋玻片的玻璃質(zhì)量也有較高的要求,，當(dāng)有劃痕，厚薄不均或凹凸不平時會產(chǎn)生亮環(huán)歪斜及相位干擾,。另外玻片過厚或過薄時會使環(huán)狀光闌亮環(huán)變大或變小,。
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